高中生物《基因工程概述》学案1 苏教版选修1.docVIP

第1节 基因工程概述 【学习目标】 1、说出基因工程的概念（A））））生物体外基因DNA分子水平剪切拼接导入表达人类需要的基因产物 1、来源：主要是从原核生物中分离纯化出来的。 2、作用：能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两 个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。 3、特点:具有专一性，表现在两个方面： ①识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列。 ②切割特定序列中的特定位点。 4、结果：经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式：黏性末端和平末端。 例1、下列有关基因工程中限制内切酶的描述，错误的是（ ） A．一种限制性内切酶只能识别一种特定的脱氧核苷酸序列 B．限制性内切酶的活性受温度的影响 C．限制性内切酶能别和切割RNA D．限制性内切酶可从原核生物中提取 （二）DNA连接酶 “分子针线” 1、分类：根据酶的来源不同，可分为EcoliDNA连接酶和T4DNA连接酶两类DNA连接酶(E·coliDNA连接酶和T4DNA连接酶)的比较： （1）相同点：都缝合磷酸二酯键 （2）区别：E．coIiDNA连接酶来源于大肠杆菌，只能使黏性末端之间连接； T4DNA连接酶来源于T4噬菌体能缝合两种末端，但连接平末端之间的效率较低。 2、DNA连接酶与DNA聚合酶作用的比较 DNA连接酶DNA聚合酶DNA 双链 单链 模板 不要模板 要模板 连接的对象 2个DNA片段 单个脱氧核苷酸加到已存在的单链DNA片段上 相同点 作用实质 形成磷酸二酯键 化学本质 蛋白质 (三) 载体 “分子运输车” 1、载体的作用：载体是基因运输工具，在基因操作过程中，使用载体有两个目的：一是用它作为运载工具，将目的基因送到宿主细胞中去；二是利用它在宿主细胞内对目的基因进行大量复制。 2、载体具备条件： 3、载体： 和 动、植物病毒 等。 最早应用最常应用的载体是质粒，它是细菌细胞中的一种很小的双链环状DNA分子。 三、基因工程的基本过程 (一) 获得目的基因（目的基因的获取） 1、获取方法主要有两种：（1）从自然界中已有的物种中分离出来，如可从基因文库中获取。 （2）用人工的方法合成。 ★获得原核细胞的目的基因可采取直接分离，获取真核细胞的目的基因一般是人工合成。 ★人工合成目的基因的常用方法有反转录法和化学合成法。 2、利用PCR （1）PCR的含义：是一项在生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术。 （2）目的：获取大量的目的基因 （3）原理：DNA双链复制 （4）过程：第一步：加热至90～95℃ DNA解链为单链； 第二步：冷却到55～60℃，引物与两条单链DNA结合； 第三步：加热至70～75℃，热稳定DNA聚合酶从引物起始进行互补链的合成。 （5）特点：指数形式扩增 (二) 制备重组DNA分子（基因载体1、重组DNA分子的组成：除了目的基因外，还必须有标记基因。 ★标记基因的作用：鉴定受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来。 2、方法：同种限制酶分别切割载体和目的基因，再用DNA连接酶把两者连接。 (三) 转化受体细胞（将目的基因导入受体细胞） 1、转化的概念：常用的转化方法：将目的基因导入植物细胞：采用最多的方法 （2）将目的基因导入动物细胞：最常用的方法 （3）将目的基因导入微生物细胞： 例2、以重组DNA技术为核心的基因工程正在改变着人类的生活。请回答下列问题。 （1）获得目的基因的方法通常包括 和 。 （2）切割和连接DNA分子所使用的酶分别是 和 。 （3）运送目的基因进入受体细胞的载体一般选用病毒或 ，后者的形状成 。 （4）由于重组DNA分子成功导入受体细胞的频率 ，所以在转化后通常需要进行 操作。 （5）将人胰岛素基因分别导入大肠杆菌与酵母菌，从两者中生产的胰岛素在功能和 序列上是相同的。 (四) 筛选出获得目的基因的受体细胞、培养受体细胞并诱导目的基因的表达（目的基因的检测与鉴定） 1、分子水平的检测 （1）首先要检测 （2）其次还要检测 （3）最后检测 提示：①DNA分子杂交技术首先提取受体细胞中的DNA，然后高温解成单链，再与同位素标记的DNA探针杂交；②抗原－抗体杂交所用到的抗体是用表达出的蛋白质注射动物进行免疫，产生相应的抗体，并提取出而来的 2、个体生物学水平的鉴定 有时还需进行 A．DNA连接酶 B．EcoRI酶 C．DNA聚合酶 D．限制酶 4. 下图为四种限制酶BamHI、EcoRI、ttindIII