基因和基因组1剖析.pptVIP

SV40载体基因组只有5243bp，序列已确定，基因组为共价闭合环DNA cccDNA ，酶切图谱及各种功能的基因定位均已详细了解。病毒DNA较易制备，但是，用SV40重组病毒转染细胞时，随着病毒的繁殖，细胞会裂解，这对基因工程中的应用是很不理想的。SV40 DNA分子小，插入的DNA不能大于2500bp。SV40 DNA的早期功能区插入外源DNA，存在致癌的隐患，为此，人们对病毒载体进行了改造，同时插入tk, dhfr, neo, cat等标记基因，构成了适用于不同目的的表达载体。pSV 载体就是以SV40为基础构建的一群载体的总称。 蛋白质 合成时间 功能 T抗原 早期 启动DNA复制 t抗原 早期 未知 VP1 晚期 主要的病毒外壳蛋白 VP2 晚期 次要的病毒外壳蛋白 VP3 晚期 次要的病毒外壳蛋白 3.3.2.6 腺病毒基因组 腺病毒 adenovirus, Ad 是一种无外壳的双链DNA病毒，基因组长约36kb，衣壳（capsid）呈规则的20面体结构，直径约80-110nm。 以病毒DNA开始复制为分界线，按转录时间的先后，将腺病毒基因大致区分为早期（E1~4）和晚期转录单位（L1~5）。各种腺病毒基因又可以进一步地分为更小的转录单位，如E1区可以进一步分为E1A和E1B，每个转录单位都至少有一个独特的启动子。病毒的两条链均有编码功能。 腺病毒易于培养纯化，其基因组为线性双链DNA，可插入较大的外源DNA片段，最大的可达约7kb，且可在宿主细胞内大量扩增，宿主细胞范围广泛，可用于基因工程和基因治疗。不足之处是Ad在细胞内复制时可大量释出壳体蛋白质，容易引起宿主细胞介导的免疫反应，使转导的细胞遭到免疫攻击而被破坏。 逆转录病毒属于正链RNA病毒，其主要的结构基因有种群特异性抗原 group specific antigen, gag ，聚合酶 polymerase, pol 和被膜蛋白质 envelope, env ，两端有长末端重复序列 long terminal repeat, LTR ，5-端有帽子结构，3-端有polyA。 3.3.2.7 逆转录病毒基因组 人类免疫缺陷病毒 HIV 颗粒是至今发现的最复杂的逆转录病毒。HIV的基本形态与其它逆转录病毒相似，有核心部分，衣壳和包膜等3种主要结构。核心部分含两个单股正链RNA基因组，两个单体在5-端由氢键相连。每个RNA基因组长9.2kb，基因排列顺序为5-LTR-gag-pol-env-3-LTR，除上述3个结构基因外，还有tat, rev, nef, vif, vpr和vpu 6个调节基因，编码6种调控蛋白质，这在逆转录病毒中较少见。HIV的基因编码区域有许多重叠，除基因tat和rev两侧含有内含子外，大多数基因无内含子，最大限度地利用了有限的RNA序列 图3-11 。 HIV的结构及其与宿主细胞的附着 3.3.3 原核生物的基因组 原核生物的细胞内没有明显的细胞核形态，其遗传物质均为DNA，与蛋白质结合形成类核 nucleoid ，基因组大小在106bp以上。在双链DNA的两条链上都有基因的编码序列。除类核构成的主基因组外，原核生物还有许多独立的DNA小分子，称作质粒。 3.3.3原核生物基因组 Prokaryotic genome 以细菌为代表讲述，有称bacteria genome。细菌对医学分子生物学有重要贡献，是基因工程研究的主要材料之一。因为： 1.构造相对简单，基因结构也不复杂，取材便利，易于培养，可选择突变株进行研究，实验结果容易重复。 2.与人类有共同的分子生物学规律，如： （1）遗传物质都是DNA； （2）主要的功能分子都是蛋白质； （3）基因密码是通用的，等等。 3.尤其是E.coli,是分子克隆是“明星“,基因工程主要原因的工程菌，因为基因工程的主要工作是克隆克核基因在原核系统中表达。 3.3.3.1、原核生物基因组结构与功能的特点 1.基因组通常仅由一条环状双链DNA分子组成。 其DNA是与蛋白质结合，但并不形成染色体结构，只是习惯上将之称为染色体。细菌染色体DNA在胞内形成一个致密区域，即类核（nucleoid），类核无核膜将之与胞浆分开。 2.基因组中只有1个复制起点。 3.具有操纵子结构。 操纵子（operon） 是指数个功能相关的结构基因串联在一起，构成信息区，连同其上游的调控区（包括启动和操纵区）及其下游的转录终止信号构成的基因表达单位。（见第六章） 4. 结构基因无重叠现象，基因组中任何一段DNA不会用于编码2种蛋白质。 5.基因序列是连续的，无内含子结构。 6.非编码DNA所占比例很少，基因组中的重复序列很少。编码蛋白质结构基因多为单拷贝，但编码rRNA的基因往往是多拷贝的，这