分子生物学课件4CH4GeneTranscriptionand.ppt

基因转录的特点： 1.基因转录是基因表达的第一步，也是基因表达调控中最重要的环节； 2.部分遗传信息的传递，只有部分作为模板，基因的转录有时间和空间的差异； 3.转录中存在链的选择、起点和终点的选择。 4.基因转录只利用DNA双链中的一条链作为模板，而另一条链不参与合成过程。模板链为无意义链，互补链为有意义链（编码链）。 原核生物的基因转录 1.转录调控因子 基因转录的控制关键——起始控制 控制转录起始的因素 ： 起始调控序列（顺式调控元件）——启动子 转录因子（反式调控元件）——RNA聚合酶 顺式调控元件cis acting elements 位于基因周围能与特异转录因子结合而影响转录的DNA序列，包括启动子、增强子等 反式调控元件trans acting factors 　与DNA上特异序列结合的蛋白因子，对转录起调控作用。如ＲＮＡ聚合酶 RNA聚合酶 E.coli中由一种RNA聚合酶催化所有RNA的合成（mRNA、t RNA 、rRNA和其它小分子RNA ） E.coli的RNA聚合酶全酶由核心酶(?2、?、?’、 ?亚基)和??亚基组成； 核心酶的功能：转录合成RNA，与DNA结合（非特异性的、松弛的），在?的帮助下识别起始序列。 ?亚基—催化磷酸二酯键的合成 利福平rifampicin和利福酶素rifamycin 能结合在?亚基上抑制RNA链的合成的 起始而不抑制链的延长， 阻止第一个磷 酸二酯键的合成。 链酶溶菌素，结合在?亚基上，抑制链 的延伸。 ?’亚基——碱性极强，与DNA模板结合的亚基； ?亚基——二聚体，可能与启动子的识别有关； ?亚基——不能独立存在，本身无催化活性，当与核心酶结合，引起a2bb’构象变化，改变核心酶与DNA结合的亲合性和特异性。 （一旦起始识别后， ? 因子脱落，核心酶才能延伸） E.coli中有多种不同?亚基；?亚基在决定RNA聚合酶起始转录中起关键作用 　　此外，RNA聚合酶可能还有解旋酶和重新螺旋化及校正的功能。 ——全功能酶（识别、解旋、螺旋、聚合延伸、校正等功能） 2. 转录调控序列 启动子promoter 操纵基因 operator 启动子：RNA聚合酶全酶以很高的亲合性结合在基因调控区的特定位点。 　　原核生物启动子序列-10区和-35区 　　　　　　　　　——必需序列 -10区：在-6~-13bp之间，共同序列为 TATAAT，又称pribnow框，酶在 此处与DNA结合成稳定的复合物，在 转录方向上解开双链形成开放型起始 结构。 -35区：共同序列为TTGACA，是RNA聚合酶 起始识别区，这一识别过程与?因子有 　　　　关。 　　-10区和-35区相距约20bp，大致是双螺旋绕两周的长度，两个结合区在分子的同一侧面，能感觉到沟底碱基的特异形态。 3.转录过程 起始： 延伸： 起始结束后， ?因子脱落，由核心酶沿模板链移动，完成延伸过程。 核心酶在DNA链上覆盖大约80bp，其中解链部分只有~18bp，RNA-DNA杂交链长度约12bp，当酶分子离开这一区域向前移动，DNA又形成双链，RNA游离出来。 终止： 终止序列—DNA上转录到一定位置后，转录停 止，又叫终止子。 特征：使转录产物产生一个颈环（发夹结构），富含嘌呤，使RNA聚合酶延伸速度减慢，甚至停止。 1.不需要ρ 因子的转录终止——强终止子 特点：DNA序列有双重对称，形成末端发 夹结构，模板DNA上有一串A， RNA3’端有UUUU，使新合成的 RNA脱落。 2.需要ρ 因子的转录终止 终止子后无连续的A， 在ρ 因子作用下，ATP酶水解，释放能量，使新生RNA与模板脱落。 转录调控 原核生物基因表达调控模型——操纵子模型 操纵子operon：由几个相关的结构基因及其控制区组成，是基因表达的协同单位。 操纵子的两个类型： 　　诱导型 阻遏型 诱导型：正常情况下基因不表达或表达水平低，