第3章 细胞工程-植物细胞工程课件.pptVIP

第三章 细胞工程------植物细胞工程 2.研究进展 植物组织培养的理论依据主要有两点： 19世纪30年代施莱登和施旺提出的细胞学说，即细胞是生物有机体的基本结构单位这一理论，使人们想到并试图应用无菌培养方法来培养植物的离体部分,在人工控制条件下来研究其生长、发育和分化的规律。 愈伤组织的形态发生主要有不定芽方式和胚状体方式两种。 不定芽方式是在某些条件下，愈伤组织中的分生细胞发生分化，形成不同的器官原基，再逐渐形成芽和根。 胚状体方式是由愈伤组织细胞诱导分化出具有胚芽、胚根、胚轴的胚状结构，进而长成完整植株。这种由愈伤组织中的薄壁细胞不经过有性生殖过程，直接产生类似于胚的结构，叫做胚状体。 二、植物细胞培养 是指在离体条件下，将愈伤组织或其他容易分散的组织置于液体培养基中，进行振荡培养，得到分散成游离的悬浮细胞，通过继代培养使细胞增殖，从而获得大量的细胞群体及相关产物的一种技术。 植物细胞培养的方法 植物细胞培养的方法，根据培养对象，植物细胞培养主要有悬浮细胞培养（单细胞培养）、单倍体培养、原生质体培养等。按照培养系统可分为悬浮培养系统、固定化培养系统等。 单倍体培养： 主要是指花药培养，即将花药在人工培养基上进行培养，从小孢子（雄性生殖细胞）直接发育成胚状体，然后长成单倍体植株；或通过组织诱导分化出芽和根，最终长成植株。单倍体植株经人为加倍后可得到完全纯合的个体。 原生质体培养：是将植物的体细胞经过纤维素酶等处理后去掉细胞壁，获得的原生质体在无菌培养基上上长、分裂，最终长成植株。 悬浮细胞培养：在愈伤组织培养技术基础上发展起来的一种培养技术。适合于进行产业化大规模细胞培养，制取植物代谢产物。 二、 单细胞培养 1、平板培养 2、看护培养 3、微室培养 4、双层滤纸培养 不定芽方式和胚状体方式是植物组织培养中最常见和最重要的两种方式。胚状体方式比不定芽方式有更多的优点，如胚状体产生的数量比不定芽多，胚状体可以制成人工种子，等等。 继代培养是愈伤组织在培养基上生长一段时间后，营养物枯竭，水分散失，并已经积累了一些代谢产物，此时需要将这些组织转移到新的培养基上，这种转移称为继代培养。 3.继代增殖阶段 愈伤组织只有经过重新分化才能形成胚状体，继而长成小植株。再分化是指愈伤组织继续培养，又可以重新分化成根或芽等器官的过程。 4.生根成芽阶段 再分化阶段 （形芽和根） 5.移栽成活阶段 生长于人工照明玻璃瓶 中的小苗，要适时移栽 室外以利生长。 去分化 再分化 形成植株 愈伤组织 愈伤组织 分化出芽 形成试管苗 实例：非洲紫罗兰的组织培养 决定植物细胞脱分化、再分化的关键因素是什么? 影响脱分化的一个重要因素是植物激素。当细胞分裂素与生长素共同使用时，能强烈促进愈伤组织的形成，而两者不同的浓度配比在再分化过程中，分别对诱导 根或芽的产生起关键作用。当细胞分裂素与生长素浓度比高时，有利于芽的发生；浓度比低时，有利于根的发生。 胚状体是怎样形成的？培养胚状体有何意义？ 愈伤组织的形态发生主要有不定芽方式和胚状体方式两种。而后者需要在愈伤组织形成后，对其进行处理，形成分散的单个细胞，再诱导其分化出具有胚芽、胚轴、胚根的胚状体，进而发育成完整植株。诱导离体的植物组织形成具有生根发芽能力的胚状结构，包裹上人造种皮．制成人工种子可以解 决有些作物品种繁殖能力差、结子困难或发芽率低等问题。 马铃薯块茎外植体直接分化芽 植物细胞的大规模培养 植物细胞(组织)培养 植物组织培养与有性生殖相比，有什么优势： ① 繁殖速度快； ② 保持亲本的优良性状（因为是无性生殖）； ③ 培育无病毒的植株 ④ 不受自然生长季节的限制（因为在具有一定人工设施的室内生产）。 植物细胞培养 p58 植物细胞（组织）培养流程 悬浮细胞培养 提取纯化 产物 收集细胞 通过植物组织培养的药物：奎宁、长春碱、洋地黄、紫草素、人参皂甙等 药物制剂 一、悬浮培养系统（cell suspension culture） 悬浮培养是细胞培养的基本方法，是将单个游离细胞或小细胞团在液体培养基进行培养增殖的技术。 适于悬浮培养 适于再生植株 适于悬浮培养 细胞悬浮系的建立 悬浮培养不能对某一细胞进行定点观察和分析，也就不能进行定点选择。因此，在进行细胞株（种子细胞）选择和需要对细胞活动跟踪观察的情况下，必须进行真正意义上的单细胞培养。由于植物细胞的团聚性，单细胞培养还比较困难。 平板培养(plate culture)：将一定密度的悬浮细胞接种到一薄层固体培养基中进行培养的技术。 单细胞的分离：用于平板培养的小细