神经解剖学研究方法与神经系统的发生课件.pptVIP

一、神经解剖学的研究方法 1. 神经结构的经典研究方法 大体解剖的研究方法 脑和脊髓外部形态，脑膜和脑血管标本的制作，脑血管的显示，脑的解剖剥离标本 脑厚片染色标本（大体） 浸染灰质：苯胺黑、洋红、柏林蓝，等 浸染白质：油溶红、立素尔大红 组织培养和脑切片染色标本 （组织水平） 细胞培养与染色（细胞水平） Protections of CNS Meninges Dura mater Arachnoid mater Pia mater Cerebrospinal fluid CSF 脑和脊髓的常用切面 纵切面：大脑纵裂 水平切面：通过室间孔上缘 冠状切面： 大白鼠实验头位 按照不同的定位图进行大白鼠脑实验时, 必须采取和定位图相应的头位。大白鼠的实验头位有多种（在定位仪上）： 用耳杆固定大白鼠的外耳道后, 调节切牙棒的高度使前囟高于人字缝尖1毫米。 调节切牙棒使其上缘高于耳间线5毫米· 调节切牙棒使耳间线中点至切牙棒前上缘的垂线与仪器水平面成5度的交角 确定大白鼠的实验头位是依据脑的冠状平面应与神经轴相垂直。中脑与间脑的分界面通过后连合后缘和脚间窝前缘, 大体上垂直于神经轴, 把它作为鼠脑的冠状基平面图, 当此平面与水平面垂直时,鼠头的位置即是规定的实验头位。 对体重为150克雌鼠的实验头一位进行了测定, 测出耳间线比切牙棒上缘高2.4毫米, 耳间线中点到切牙棒前上缘的垂线与水平面成5度的交角。 组织学的研究方法 固定组织的标本制作方法 固定、切片（石蜡、冰冻、振动、超薄） 染色 神经元染色：包括Nissl尼氏，焦油紫，中性红、硫堇，甲苯胺蓝、培花青，等。苏木素-伊红HE；银浸染法（Golgi, Cajal） Golgi银浸染法 Golgi stain 重金属镀染神经细胞方法的贡献： 能在大量神经细胞中镀染出少数细胞的全貌。 十九、二十世纪神经系构造的网状学说: Cajal stain 显示神经元内的神经原纤维neurofibrillary及轴突末梢 神经元学说 神经细胞是一个独立的生物学单位（神经元），神经元间的联系不是通过细胞的连续，而是通过彼此的接触来完成的。并描述了神经元的树突及轴突，提出树突是接受区，神经元极性的概念。 组织学的研究方法 髓鞘染色：Weigert, Marchi,Nauta Weigert 1884 染髓鞘，而不能用于研究薄髓和无髓纤维Luxol坚牢蓝属于铜-酞菁染料，在酒精溶液内具有与髓鞘磷脂结合的染色特性。 Marchi 1890 : 染变性的髓鞘 Nauta法: 将变性纤维染成黑色，抑制正常纤维着色（顺行追踪法） 少突胶质细胞与中枢神经髓鞘 突起末端扩展为扁平状包卷中枢神经元的轴突形成髓鞘 Schwann细胞与周围神经髓鞘 Schwann细胞与周围神经髓鞘 年龄及病理变化 显微镜 光学显微镜 电子显微镜 共聚焦显微镜 活体成像显微技术，等等 Electron microscope 1950s ：TEM，SEM 证实神经元学说的证据 神经组织的特点 Nucleus 5~10 um 有丝分裂活动在出生后不久停止。 Nuclear envelope 核膜 ：双层 7nm； 核孔 ；核内染色质（20nm 核仁 nucleolus）,5-10nm Rough endoplasmic reticulum, RER Nissl body SER, 调节神经元内钙信号 线粒体 Mitochondria 形态：源性、卵圆形或杆状，00.1~0.5 um 分布：胞体、轴突、树突，轴突末梢多见。 结构：外膜、内膜和嵴 与长轴垂直 、周围间隙和嵴内间隙（外室）、内室。 能量产生、储存和供给的场所。进行三羧酸循环、呼吸链的氢和氧离子传递以及氧化磷酸化反应。 细胞骨架 cytoskeleton 组成： 微管、微丝和中间丝 分布：胞体、轴突、树突 微管 microtubule 组成：微管蛋白 tubulin，微管相关蛋白MAP 分布：胞体、轴突、树突. 25-28nm 功能：维持神经元的形状，物质转移、运输的轨道。 神经丝 neurofilament 组成： 10nm，中间丝蛋白vimentin，desmin, nestin, GFAP 分布：胞体交叉成网、轴突最丰富、树突，星形胶质细胞. 功能：维持神经元的形状，参与蛋白质的翻译过程、参与轴浆的运输。 微丝 microfilament 组成：3-5nm,actin，myosin, tropomyosin 原肌球蛋白 分布：神经元周边、胞膜下、并与肌动蛋白结合蛋白结合形成致密网。 功能：参与生长锥突起和伪足的形成与回缩并对细胞膜特化结构（突触前后膜）的形成有重要作用. 树突 dendrites的