课题2.土壤中分解尿素的细菌的分离和计数详细分析.ppt

* 1.研究和应用微生物的前提是？ 2.实验室培养微生物关键是什么？ 防止杂菌入侵，获得纯净的培养物 （1）需要为培养的微生物提供合适的营养和环境条件 复习回顾： （2）需要确保无处不在的微生物无法混入。 a.培养基种类： b.培养基成分： c.培养基配置： 固体培养基、液体培养基 碳源、氮源、水、无机盐 计算、称量、溶化、调pH、灭菌、倒平板 PH、氧气、温度等 无菌 技术 确保培养物不被污染 确保实验员不被污染 3.分离、纯化大肠杆菌的方法及原理？ 方法： （1）利用平板划线法或稀释涂布平板法接种培养 （2）挑选单一菌落进行扩大培养 原理： 不同微生物菌落特征不同 思考：还有什么其他方法能分离微生物？ 专题二 微生物的培养与应用 课题2.土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 实例分析： 尿素是一种有机物，不能被农作物吸收，植物如何才能利用尿素？ 土壤中的细菌可以将尿素分解为氨 这类细菌可以产生脲酶 土壤中的细菌为什么可以分解尿素？ 思考：怎么从土壤中分离出这些细菌呢？ CO NH2 脲酶 + CO2 NH3 + H2O 阅读课本P21，感悟科学家寻找耐高温的DNA聚合酶给你的启示。你如何将土壤中分解尿素的细菌分离出来？ 1.原理： （一）筛选菌株 人为提供有利于目的菌株生长的条件（包括营养、温度、pH等），同时抑制或阻止其他微生物的生长。 一、研究思路 利用以尿素为唯一氮源的培养基进行筛选。 2.尿素分解菌分离的原理： 思考：分离土壤中分解尿素的细菌时，你将如何配置培养基 ①加尿素 ②不加尿素 ③加琼脂 ④不加琼脂 ⑤加葡萄糖 ⑥不加葡萄糖 ⑦加硝酸盐? ⑧不加硝酸盐? A．①③⑤⑦ B．②④⑥⑧?? C．①③⑤⑧ D．①④⑥⑦ C 能。只有产生脲酶的细菌才能利用尿素作为氮源而生存 此培养基能否筛选出产生脲酶的细菌？为什么？ 化学组成 提供的营养 KH2PO4 1.4g Na2HPO4 2.1g MgSO4﹒7H2O 0.2g 葡萄糖 10.0g 尿素 1.0g 琼脂 15.0g 蒸馏水定容到1000mL 学生活动：下表为分离分解尿素的细菌的培养基配方，请分析、回答下列问题。 无机盐 无机盐 无机盐 碳源 氮源 不提供营养，凝固剂 水 3.选择培养基： 允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。 举一反三:分离下列微生物，你将如何配制培养基 （1）将土壤中的固氮菌分离出来 （2）将土壤中自养微生物分离出来 （3）筛选出抗青霉素的微生物 （4）筛选出耐高浓度食盐的微生物 无氮源的培养基 无碳源的培养基 含有青霉素的培养基 含有高浓度食盐的培养基 延伸思考： 3.分离得到的都是能分解尿素的微生物吗？ 不一定，只要能利用尿素的微生物都可以分离出来。如芽孢杆菌、小球菌、假单胞杆菌、克氏杆菌、棒状杆菌、梭状芽孢杆菌，某些真菌和放线菌也能分解尿素。 1.含有尿素的选择培养基只能分离出一种分解尿素的细菌吗？ 不一定。因为有些微生物可以利用其他微生物的代谢产物进行生长繁殖。因此，还需借助生物化学方法对分离的细菌作进一步的鉴定。 2.如何鉴定分离得到的就是能分解尿素的细菌？ 在以尿素作为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂,接种培养该细菌，若指示剂变红，说明该种菌分解了尿素。（见：教材P26课题延伸） 实验探究： 要验证以尿素为唯一氮源的培养基对土壤中的细菌确实具有选择作用，你该如何设计实验。 实验组: 对照组: 培养基中的氮源只加尿素 牛肉膏蛋白胨培养基 接种 接种 只生长尿素细菌 生长多种微生物 一般在实验室培养微生物过程中，除分离、纯化微生物外，还需对微生物进行计数。那么，如何统计某环境中某种微生物的数量呢？ 1.常用什么方法来统计活菌的数目？为什么不用平板划线法？ 2.实例分析：两位同学的结果是否准确？导致不准确的原因可能是什么？由此，你得出的结论是什么？ 阅读课本22页统计菌落数目部分： 3.如何根据培养基上菌落数推测出样品中的每克样品中的活菌数？ 4.微生物计数都有哪些常用方法？ （二）统计菌落数目（微生物计数） 稀释涂布平板法。平板划线法无法较准确计数，一般只用于菌种的分离 同学 平板1 平板2 平板3 平均数 评价 甲 230 230 乙 21 212 256 163 结论 没有设置重复组，因此结果不具说服力。 1个平板的计数结果与另 2个相差太远,说明操作过程中可能出现了错误 1.设计实验时，一定要涂布至少3个平板，作为重复组，才能增强实验的说服力与准确性。 2.在分析实验结果时，一定要考虑所设置的重复组的结果是否一致（30-300个），结果不一致，意味着操作有误，需要重新实验。不能简单地将3个平板的计数值用来求平均值。 2.实例分