大肠杆菌O15-H7论文：快速检测大肠杆菌O157-H7胶体金免疫层析方法的建立.docVIP

大肠杆菌O157:H7论文：快速检测大肠杆菌O157:H7胶体金免疫层析方法的建立 【中文摘要】大肠杆菌O157：H7(Escherichia coli O157:H7)是引起出血性肠炎和溶血性尿路综合症的主要致病菌。牛肉、奶制品、蔬菜等食物是其主要传播途径,除此之外,动物和人、人和人的接触也可能导致大肠杆菌O157：H7感染。由于其感染发病快、死亡率高,严重影响了人民的身体健康。因此,快速诊断大肠杆菌O157：H7具有重要的现实意义。本文旨在建立快速、特异性强、适用于大量样品和现场检测的大肠杆菌O157：H7胶体金免疫层析方法。本文采用全菌抗原和细胞碎片抗原分别免疫日本大耳兔,制备了抗大肠杆菌O157：H7多克隆抗体。获得的多克隆抗体效价达106。分别用辛酸-硫酸铵法和磁珠吸附法对多克隆抗体进行纯化,纯化后的抗体通过SDS进行蛋白分析,并用斑点杂交对纯化后的抗体进行特异性分析。结果显示,辛酸-硫酸铵法纯化后的抗体仍有较多的杂蛋白,而磁珠吸附法能有效去除这些杂蛋白,得到较纯的抗体。纯化后的多克隆抗体均与其它一些细菌有交叉反应。本文采用胶体金标记商品化的单克隆抗体,通过把多克隆抗体和驴抗鼠抗体(二抗)喷涂于硝酸纤维素膜分别作为检测线(T线)和质控线(C线),研制了大肠杆菌O157：H7胶体金快速检测试纸条,并对其进行了评价。通过实验,确定了试纸条工艺条件如下：标记pH为8.0、蛋