黄精属5种药用植物根状茎的结构及其组织化学定位.docVIP

黄精属5种药用植物根状茎的结构及其组织化学定位 　　[摘要] 目的：研究5种黄精属植物黄精Polygonatum sibiricum、多花黄精P. cytonema、长梗黄精P. filipes、湖北黄精P. zanlanscianense和玉竹P. odoratum的显微结构及组织化学定位。方法：运用荧光显微镜观察维管束的类型，运用扫描电子显微镜观察晶体的形态，运用组织化学开展多糖、皂苷与挥发性成分的定位研究。结果：黄精属植物的维管束结构类型主要有外韧型、不完全周木型和周木型3类，种间导管分子排列疏密有区别。扫描电镜下，黏液细胞内的针晶束形似柱晶束。黄精属植物根状茎中，多糖类物质多分布于黏液细胞中，皂苷类和挥发油类物质多分布在黏液细胞以外的基本组织中。结论：黄精属植物根状茎中维管束类型和导管的排列状态特征可以作为种间鉴别的重要依据；多糖与皂苷类化合物的分布于不同的细胞组织。 　　[关键词] 黄精属；组织化学定位；维管束；针晶束 　　我国黄精属Polygonatum共有39种，其中31种有药用记载[1]，包括黄精和玉竹2味常用中药，具有滋阴润肺，养胃生津等功效。《中国药典》2010年版收载药材黄精来源于植物黄精P. sibiricum Delar. ex Redoute、多花黄精P. cytonema Hua和滇黄精P. kingianum Coll. et Hemsl的根状茎；药材玉竹来源于植物玉竹P. odoratum （Mill.） Druce的根状茎。由于该属药用部位形态特征与显微结构具有相似性，很多类群均在不同地区分别作黄精与玉竹流通。为此一些学者开展了药材性状与显微特征的研究，但结果报导不一致，如施大文报导黄精属植物根状茎中维管束类型有外韧型和周木型[2]，而林琳认为除报导的2种外还有不完全周木型[3]；此外，有的学者认为黄精属植物根状茎中黏液细胞内的草酸钙结晶是针晶束，有的学者认为应是柱晶束[4]。 　　黄精属药用植物根状茎中主要有多糖、皂苷和少量挥发油等次生代谢产物，其中黄精多糖类化合物具有抗免疫力、增加心肌的活力、降血糖等作用[5]；黄精皂苷具有调节血糖，抗肿瘤等作用，挥发油具有抑菌、抗肿瘤等作用[6]。植物的次生代谢产物往往分布于特定的组织中[7-8]，但关于黄精属植物根状茎中次生代谢产物的分布及与组织结构之间的关系尚未见报导。 　　为准确鉴定黄精属药材的来源，本文运用显微镜明场、偏光和荧光等不同光路模式对5种黄精属植物根状茎显微切片进行了维管束类型和针晶束形态的观察，在此基础上，运用组织化学对其多糖、皂苷和挥发油等分别进行了定位研究，以为揭示黄精属植物根状茎中次生代谢产物的分布规律，为开展黄精与玉竹类药材的质量评价奠定基础。 　　1 材料与方法 　　1.1 样品 　　安徽省的黄精属种类丰富，其中4种黄精属植物被药典收录，是黄精和玉竹药材的正品来源。此外，长梗黄精P. filipes作为黄精的地方习惯用品也流通进入药材市场；湖北黄精P. zanlanscianense的根状茎粗大，市场上有少量流通，但有文献报道其味苦，建议不宜作黄精使用[9]。 　　在黄精与玉竹的药材性状鉴别中，常依据根状茎的形态，划分为圆柱状、连珠状、鸡头状和姜块状4种。从根状茎的形态上难以区分其来源。本实验选择安徽的皖东丘陵、皖西大别山和皖南山区进行不同居群的采样，共收集了5种常见的黄精属药用植物，并移栽至安徽中医药大学药用植物园（表1），所有材料均经安徽中医药大学王德群教授鉴定。每种植物选3～5株成熟个体，取根状茎中前年生的完整年苗为材料。 　　1.2 解剖学试验 　　FAA固定液对5种植物的根状茎进行分别固定，经乙醇系列脱水、透蜡、包埋后常规石蜡切片，切片厚度为8～10 μm。番红-固绿染色，中性树胶封片，用Lecia DM6000B显微镜观察其内部结构特征。对黏液细胞进行计数，在显微镜下放大400倍时每一视野下对每个样品测20组，取其平均数。 　　1.3 维管束类型观察 　　黄精属植物根状茎维管束中木质部的导管数目不多，常规的番红-固绿染色在显微镜下观察维管束类型不是十分清楚。考虑到导管中次生壁中主要是木质素等成分组成，木质素是一种含有羟基和甲氧基的高分子芳香族化合物，是苯丙烷的衍生物[10]，通过荧光显微镜观察时能自发荧光，从而清晰显现维管束类型。本实验运用了Lecia DM6000B的荧光模式对维管束的形态进行观察。 　　1.4 组织化学试验 　　1.4.1 多糖类化合物的组织化学定位 黄精属植物根状茎的石蜡切片脱蜡后运用高碘酸-希夫反应，树胶封片，Lecia DM6000B显微镜观察并照相。 　　1.4.2 皂苷类化合物的组织化学定位 取黄精属植物新鲜根状茎进行徒手切片，置5%醋酸铅水浸泡10