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萍乡红鲫论文：萍乡红鲫ZP3蛋白组织差异性表达及其在卵母细胞中免疫荧光定位 【中文摘要】萍乡红鲫(Pingxiang red-transparent crucian carp, Carassius auratus var. Pingxiangnensis)主要分布于江西省萍乡地区,是三倍体野生鲫鱼的一种突变种。因其通体呈肉红色、透明而得名肉红鲫,是一种集食用和观赏价值于一体的鲫鱼品种,在2008年被国家水产原良种委员会审定为新的养殖品种-萍乡红鲫。萍乡红鲫可以行雌核发育和两性生殖两种生殖方式。本论文主要包括以下三部分：一、利用RACE-PCR技术克隆得到萍乡红鲫ZP3基因cDNA全长序列,该序列全长1385bp,有一个1308bp的完整开放阅读框,编码435个氨基酸,经过氨基酸序列比对,121-376位氨基酸残基属于ZP家族domain超家族结构域。二、利用荧光定量PCR的方法检测了ZP3基因在萍乡红鲫卵巢、心脏、肝脏、脾脏、肾脏、脑等组织中的差异性表达,相对定量分析结果显示ZP3基因在肝脏中表达量最低,在卵巢组织中的表达量显著多于其他五个组织,约是肝脏中的26656倍,除卵巢组织外,ZP3基因在所检测的其他五个组织中都有微量的表达。三、将纯化好的ZP3蛋白作为抗原免疫白兔,制备得到了多克隆兔抗鱼ZP3蛋白血清。用Elisa间接法检测了抗血清的效价。将得到的抗血清用于卵母细胞冰冻切片免疫荧光定位实验。Elisa实验结果显示：抗血清效价约为25600且抗血清的特异性良好。免疫荧光实验结果显示：在早期发育的卵母细胞中,就有少量的ZP3蛋白存在,随着卵母细胞的发育,ZP3蛋白的合成累积量逐渐增加。在V时相的卵母细胞中,ZP3蛋白在卵母细胞细胞膜上和细胞质中的存在量达到了最大。ZP3蛋白在精卵识别的过程中起到了关键作用。本研究为进一步了解萍乡红鲫ZP3蛋白在受精时的具体功能,提供了一点分子生物学方面的数据。 【英文摘要】Pingxiang red-transparent crucian carp, Carassius auratus var. Pingxiangnensis, mainly distributed in Pingxiang city of Jiang Xi Province, is a triploid wildness crucian carp mutant. For its whole transparent body, it was named Carassius auratus var. Pingxiangnensis. The fish is a good crucian carp specie for edible value and ornamental value, and it is approved by national aquatic original improved variety committee as a new cultural fish specie in 2008. Carassius auratus var. Pingxiangnensis has two modes of reproduction,which includes bi-sexual and gynogenetic reproductive mode.The content of this research includes three parts:First:The ZP3 cDNA sequence from Carassius auratus var. Pingxiangnensis is cloned by the method of RACE-PCR. Its full length is 1385bp, and an ORF is 1308bp for encoding a peptide of 435 aa. By blasting of amino acid sequence, amino acid residue from 121 to 376 aa belongs to ZP family domains.Second:The ZP3 mRNA expression levels of different tissues in Carassius auratus var. Pingxiangnensis are detected by the technology of real-time PCR. The tissues include heart, liver, spleen, kidney, brain and ovary. The results of relative quant