标准病理组织制片和染色技术技术方案.ppt

病理组织制片和染色技术 张进华 一、染色的目的 病理学的各种切片，都必须应用一种以上的染料通过不同的方法将切片的各种不同的组织结构给予显示出来，以利于镜下辨别其各种不同的形态，做出正确的诊断。 二、染色的作用 1、化学作用： 染液中的阴阳离子与组织中的阴阳离子相互作用所完成的染色。染液中有酸性和碱性染料之分，酸性染料有染色作用的部分是阴离子，而碱性染料有染色作用的部分则是阳离子。组织的各种细胞中细胞核为酸性，它可与苏木素液中的阳离子发生反应。细胞桨中的阳离子则与伊红液中的阴离子发生反应，完成染色。 2、物理作用： 　　染料通过浸透，分散浸入到组织的间隙中，因受分子的引力作用，染液中的色素粒子被吸附而完成染色过程。 3、染色方法 　　应用于常规病理切片的染色方法称为普通染色法或HE染色法，而用特别的染色法则称为特殊染色法。 结果：细胞核：蓝色，软骨基质钙盐等深蓝色；细胞浆深浅不同的粉红色，嗜酸性颗粒鲜红色；胶原纤维呈粉红色，肌纤维呈鲜红色，弹力纤维呈亮红色，红血球为桔红色，蛋白基质为粉红色。 染色时的注意事项 （1）切片烘烤以切片附贴牢固为原则，否则容易掉片。 （2）切片脱蜡一定要彻底，不然会导致染色深浅不一。 （3）切片染苏木素前可令其无水化，这样可延长苏木素的寿命。因为每次染色前，切片水洗，然后进入染液虽然每次带入的水分很少，但随着次数的增加，所带入的水分足可以稀释染液影响染色的质量。 （4）切片在苏木素的染色时间应充分宁过勿不足。对于初学者来说更应过染，否则分化会过度导致染色过浅。 （5）切片分化时，要根椐不同的组织来确定分化时间，并不断积累经验。 （6）伊红染色时间也要充分，经低浓度洒精时应仔细观察，必要时快速通过，以免过于褪色。 （7）切片致无水酒精后，不要在控干无水酒精时让切片干涸，可以不经控干直接地进入碳酸二甲苯（也可以进入二甲苯酒精混合1：1）碳酸有较强的吸水性透明也好很适合南方地区。 （8）切片从二甲苯中取出封固时，切不能让其干涸，因南方地区空气潮湿干涸的切片与空气接触，可吸收其水份。这样的切片很容易裉色。切片不干涸，表面被着二甲苯，由于它不溶于水起到与水隔绝的作用。 （9）滴中性树胶封盖切片，胶不能太浓，太浓胶难以均匀铺开，且易产生气泡，又不能太稀过稀的胶由于二甲苯含量较多，当切片干燥时，二甲苯挥发掉，胶封的切片收缩，即可导致一半切片没有被胶封固的结果。最合适的胶应是滴下成珠。 （10）封固切片时，盛胶的瓶子及瓶盖四周不要留有余胶，否则瓶盖难以打开。因此每次用完后都必须将其擦干净。当打不开瓶盖时应放入烤箱中烘烤，即可打开。 （11）标签附贴要认真，不要贴得歪歪斜斜，影响切片的外观. 染液的配制 (一）苏木素的配制 1、苏木素的种类： A、明矾苏木素（Harris,Mayer,　Ehrlich） B、铁苏木素（Wiegert,Heidnhain） C、钨苏木素（PTAH） D、铅苏木素（Soecia） （1）Harris苏木素的配制（Harris.l900） 苏木素 0.5g 无水乙醇 5ml 钾明矾（硫酸铝钾） 10g 蒸馏水 100ml 氧化汞 0.25g 冰醋酸 4ml 预先把苏木素溶于无水酒精中配制时，取一三角瓶倒入蒸镏水，再加入钾明矾，于电炉上加热至90℃左右时，拔去电源加入酒精苏木素，再插上电源继续加热，持续3~5分钟，拔去电源，加入氧化汞，此时可产生大量的气泡，应防止其溢出瓶外。再继续通电加热，煮沸后持续3~5分钟，此时溶液表面看呈深紫黑色，即可撤离电源，用备好的冰凉水，将烧瓶迅速的插入水中，让染液迅速冷却，中止氧化放入暗处。于第二天过滤后再加入冰醋酸，即可使用，染色时间5－15分钟。 （2）Mayer氏苏木素（Mayer,1903） 苏木素 0.1g 蒸镏水 100ml 钾明矾 5g 柠檬酸 0.1g 水合醛 5g 碘酸钠 20mg 将蒸包馏水稍为加温，加入苏木素不停地搅拌直至溶解，再加入钾明矾，令其溶解后再加入碘酸钠过滤后即可使用，染色时间10－20分钟，如果先用天表蓝为媒染剂，染色时可在2－3分钟。 配制苏木素的注意事项 1、苏木素可以配成5%或10%，让其氧化产生苏木红，然后根椐每次配制溶液的量，再决定加入多少。 2、在配制苏木素时，三角烧瓶的选择也很重要，例如，配制500ml 的溶液，应选用1500－