【参考】非人灵长类克隆及治疗性克隆的机理研究.docVIP

一、研究内容 深入了解在灵长类体细胞克隆胚分化与去分化过程中基因与蛋白表达、转录调控及信号传导的分子机理是本项目拟解决的关键科学问题。 本项目的研究重点包括： 1. 完善动物克隆技术，尝试建立具有自主知识产权的无性繁殖技术 以改进核移植流程，提高克隆效率为主，探讨建立非细胞体系的无性繁殖技术的可能性。 2．体细胞的去分化 探索和发现卵母细胞中与体细胞去分化相关的关键蛋白、化学物质。对于启动重编程相关的关键蛋白和化学物质进行深入研究，设计调控基因表达的主要成分表，控制发育进程。 3．维持胚胎干细胞多能性的机制 研究Nanog、Oct4等转录因子的各个结构域在行使功能时发挥的作用; 以胚胎干细胞未分化的标志性Oct4及Nanog为核心，研究其调控的下游基因及其相互关系 以胚胎干细胞未分化的标志性Oct4及Nanog为核心，研究其调控的下游100个基因及其相互关系采用DNA芯片对猴（Macaca mulatta）不同发育时期（从囊胚期、）的基因表达模式进行分析，寻找在发育过程中特征性表达的基因和基因家族；揭示基因和基因家族。 二、预期目标 总体目标: 利用核移植手段获得体细胞克隆恒河猴，揭示动物克隆和治疗性克隆研究中的细胞去分化和分化的分子机制。 五年预期目标: 建立高效的灵长类核移植方法，克隆恒河猴；从克隆胚胎中分离ES细胞系； 揭示Nanog、Oct4等多能性转录因子的结构基础及在蛋白水平上的调控机制；并确定和克隆它们的下游因子，探讨其作用机制； 获得诱导体细胞重编程的关键蛋白并阐明其作用机制； 发现恒河猴体细胞核移植后早期胚胎发育过程中表达的重要基因及其功能和作用方式；研究遗传印记对克隆胚发育的影响； 了解恒河猴胚胎干细胞向神经干细胞分化的主要信号途径； 筛选在神经系统发育过程中特征性表达的基因和基因家族； 培养研究生80-100名。 在本领域的国际代表性学术刊物上发表60-80篇学术论文，其中影响因子高于8的不少于10篇。 三、研究方案 学术思路技术途径 图2， 总体研究方案和课题设置图 与国内外同类研究相比的创新点与特色： 与以往同类研究相比，本项目采用系统生物的研究策略，应用基因组学和蛋白质组学等手段，较系统地研究细胞分化和去分化的分子机制。同时，发挥我国灵长类动物的资源优势，依靠国家对灵长类研究的支持和973项目对科学前沿探索的鼓励，联合国内外相关领域优势单位的科学家，利用和整合已有的科学与技术平台，通过学科交叉、集中优势，解决动物克隆和治疗性克隆研究中的关键科学问题。 可行性分析 负责人 主要承担单位 经费 比例% 非人灵长类克隆研究 周琪 中国科学院动物研究所 中国科学院昆明动物所 21.0 非人灵长类克隆胚重编程过程早期表达重要基因的克隆及功能研究 周琪 JeanPaul Renard 中国科学院动物研究所 Unité de Biologie du Développement (INRA-CNRS), Jouy en Josas, France 15.5 分离和鉴定体细胞去分化关键蛋白 冷静 南京医科大学 17.5 维持胚胎干细胞全能性的机理研究 裴端卿 中科院广州生物医药与健康研究院 17.5 恒河猴胚胎干细胞向神经干细胞分化的机制研究 宿兵 Pierre Savatier 中国科学院昆明动物研究所Inserm Unité 371 Embryonic stem cells: self-renewal and early commitment (INSERM) 10.5 非人灵长类胚胎发育过程中基因组的程序化表达及早期中枢神经系统分化的分子机制 宿兵 中国科学院昆明动物研究所 18.0 课题1.非人灵长类克隆研究 主要研究内容： 1. 灵长类动物早期胚胎主要特征研究 1）灵长类动物卵及克隆胚的生物学特性的研究 2）灵长类动物克隆胚胎基因组甲基化研究 3）灵长类动物种间核移植研究 2. 核供体细胞的制备和优化 1）用于核移植的体细胞和胚胎干细胞的筛选和制备 2）灵长类动物成纤维细胞培养方法的建立和优化 3. 通过核移植证明去分化 1）灵长类动物克隆 2）从克隆胚胎中分离胚胎干细胞并建系 目标：建立高效的灵长类核移植方法，克隆恒河猴；从克隆胚胎中分离ES细胞系 课题2. 非人灵长类克隆胚重编程过程早期表达重要基因的克隆及功能研究 主要研究内容： 1. 胚胎基因组早期表达基因的研究 1）早期表达基因的筛选、鉴定 2）早期表达基因的染色体定位 2. 在胚胎早期发育过程中起关键作用的新的转录因子的研究 1）新的转录子的分离 2）新的转录子的鉴定及其生物学功能的研究 3. 印记的消除对灵长类动物克隆胚发育的影响 1）去甲基化药物