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第五讲1 中药含量测定方法 （Determination of Traditional Chinese Medicine） ★含量测定的定义和意义 中药制剂的含量测定是指用适当的化学方法或仪器分析方法对制剂中某种（些）有效成分或有效部位进行的定量分析。并以其测定结果是否符合药品标准的规定来判断药品的优劣，是控制和评价药品质量的重要方法。 ★含量测定方法 中药制剂含量测定的方法包括化学分析法和仪器分析法两大类。由于中药制剂组成复杂，仪器分析法更为常用。《中国药典》中药制剂含量测定方法概况见下表。 ★本章重点介绍TLCS、HPLC、GC、HPCE、挥发油测定法、分光光度法、浸出物测定法、容量分析、重量分析。 一、薄层色谱法 实验仪器 CAMAG Linomat 5 半自动点样仪 CAMAG Scanner3 薄层色谱扫描仪 CAMAG 数码摄像系统 甘草（Licorice ) 种类：乌拉尔甘草（Glycyrrhiza ura.Fis.） 胀果甘草（Glycyrrhiza inflata Bat.） 光果甘草 (Glycyrrhiza glabra L.) 药效:补脾益气、解毒保肝、润肺止咳、调和诸药。 化学成分:皂苷类（甘草酸）、黄酮类（甘草苷）、香豆素类、氨基酸和多糖类化合物。 甘草的硅胶薄层扫描指纹图谱(SG-TLCS-FP), fingerprint TLCS-3D-FP在监控药材质量方面的应用 聚酰胺薄层指纹图谱（PA-TLCS-FP) 甘草聚酰胺薄层扫描图谱 1、概述 （1）薄层色谱法的特点 ● 设备简单，操作方便。 ● 广泛地选用各流动相，比气相色谱灵活。 ● 灵敏度较高 ● 薄层色谱法适于分析小量样品 ● 可以采用多种展开方式：如，双向展开，多次展开，分步展开，连续展开；分离原理是的物理化学原理，例如，吸附色谱，分配色谱，离子交换，薄层电泳，薄层等电聚焦。适于分析热不稳定，难挥发的样品。 （2）方法原理　　 原理：薄层色谱分离法是将固定相吸附剂均匀地涂在玻璃上制成薄层板，试样中的各组分在固定相和作为展开剂的流动相之间不断地发生溶解、吸附、再溶解、再吸附的分配过程。 不同物质上升的距离不一样而形成相互分开的斑点从而达到分离。 （3）固定相 ● 硅胶：微酸性极性固定相，适用于酸性、中性物质分离（可以制备成酸度不同或碱性硅胶扩大使用范围） ● 氧化铝：碱性极性固定相，适用于碱性、中性物质分离（可以制备成中性或酸性氧化铝扩大使用范围） 　 ● 聚酰胺：含有酰胺基极性固定相，适用于酚类、醇类化合物的分离 ● 纤维素：含有羟基的极性固定相，适用于分离亲水性物质 2、方法一：薄层色谱-可见分光光度法 1）点样：条状，50－300ul 2）定位：对照的位置，区带的范围 –紫外、荧光、碘蒸气、对照品定位、紫外扫描 3）捕集： 4）洗脱：类似 柱色谱 –渗漉、多次浸出、加热温浸、索氏回流提取 –荧光板应洗脱后再比色 5）显色及比色 –显色剂用量 –反应时间、反应温度 –显色稳定性 –空白试剂及固定相最好不显色 Off-line 3、方法二：薄层色谱-紫外分光光度法 ● 不需加显色剂 ● 其他同薄层色谱-可见分光光度法 Off-line 4、薄层色谱扫描法 （Thin Layer Chromatography Scan,TLCS）Off-line 1）定义 薄层扫描法（TLCS）系指用一定波长的光照射在薄层板上，对薄层色谱中有紫外或可见吸收的斑点或经照射能激发产生荧光的斑点进行扫描，将扫描得到的图谱及积分值用于药品定性定量分析的方法。 2）特点 具有分离分析双重功能。与高效液相色谱法比较，具有多通道效应，可同时平行分离分析多个样品；流动相用量少且选择范围宽、更换方便；固定相为一次性使用，对样品的预处理要求不高等优点。在中药及其制剂检验中，是重要的分析方法。 《中国药典》中有32个中成药品种采用该法进行含量测定。 3）仪器及其工作原理 1.薄层扫描仪 中国药典采用双波长薄层扫描仪.常用的有岛津CS-930型和CAMAG-Ⅱ型等。 2.扫描仪工作原理 4）测定方式 （1）吸收法 适用于有紫外（可见）吸收的成分，较常用。该法又可采用反射法或透射法测定。理论上讲，透射法比反射法优越，但实际工作中常用反射法，因为紫外光不能通过玻板。 （2）荧光法 适用于有荧光性质的成分，例如小檗碱等。该法仅采用反射法测定，其灵敏度 比吸收法高。 5）测定波长 （1）单波长 一般用于荧光测定法，即用某一波长的紫外光（激发光）进行扫描。对玻板和斑点的质量要求较高。 （2）双波长 主要用于吸收测定法。该法可消除背景干扰，对玻板和斑点的质量要求不高，故较常用。测定时，样品波长（λs