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miR—185在卵巢癌组织中的表达及其临床意义 　　摘要：目的 探讨miR-185（Homo sapiens miR-185，miR-185）在卵巢癌组织中的表达及其临床意义。方法 运用qRT-PCR检测miR-185在卵巢癌及癌旁组织中的表达情况，分析其表达与卵巢癌临床分期及淋巴结转移间的关系。结果 qRT-PCR检测显示，在37例卵巢癌组织中miR-185的表达值为（0.57±0.06），与癌旁对照组（1.02±0.11）相比，差异有统计学意义（P0.01）；miR-185在卵巢癌临床Ⅲ/Ⅳ期、Ⅰ/Ⅱ期表达值分别为（0.22±0.02）、（0.74±0.09），差异有统计学意义（P0.01）；淋巴结转移的与无淋巴结转移miR-185表达值分别为（0.38±0.05）、（0.64±0.08），有淋巴结转移的miR-185表达水平低于无淋巴结转移，二者差异有统计学意义（P0.01）。miR-185的表达随着卵巢癌临床分期演进而降低。结论 miR-185与卵巢癌的发生、临床进展、转移密切相关，其可能成为卵巢癌治疗、预后判断的潜在生物学指标。 　　关键词：miR-185；卵巢癌；生长与侵袭 　　miRNAs是一组长度约为22个核苷酸的非编码单链RNA，其作为基因表达的一个重要调控因子，通过对靶基因的翻译抑制和mRNA降解从而在转录后水平调控基因的表达。miRNA参与多种细胞生物学过程，包括细胞的分化、增殖、迁移、代谢、以及调亡。以前的研究已经证实miRNA在肿瘤中的潜在作用，并指出miRNA的表达异常与肿瘤的发生发展相明显相关。miRNA通过调控肿瘤相关基因以及不同的通路在癌症的发病机理中起重要作用[1-2]。 　　miR-185位于染色体22q11.21，是一个具有抑癌特性的miRNAs。研究报道miR-185在很多癌症中表达下调，包括前列腺癌、胶质瘤、卵巢癌以及肺癌等[3-5]。这说明miR-185表达下调可能在肿瘤的发生发展中具有重要作用。本研究通过采用qRT-PCR研究检测miR-185在卵巢癌组织中的表达，分析其表达与临床分期及淋巴结转移间的关系，探讨卵巢癌发病的分子机制和寻找更有效的治疗方法提供实验依据。 　　1资料与方法 　　1.1标本收集 标本均取自于本院2009年7月～2012年10月卵巢癌和癌旁正常组织标本46例，组织立即放于液氮保存。所有组织标本活检后均经病理学诊断确认。 　　1.2逆转录 常规Trizol试剂（Invitrogen公司）抽提组织总RNA。紫外分光光度计测定RNA纯度和浓度。逆转录按转录miRNA逆转录试剂盒（吉玛生物公司）说明书进行。反应体系：5×RT缓冲液4 μL、10 mmol/L dNTP 0.75 μL、25 mmol/L镁离子3 μL、1 μmol/L miRNA特异性RT引物1.2 μL、40 U/μl RNA酶抑制剂 0.25 μL、200 U/μL MMLV逆转录酶0.2 μL、RNA 1 μg，无酶水补至20 μL。反应条件：16℃ 30 min，42℃ 30 min，再以85℃ 10 min。产物-20 ℃冻存备用。 　　1.3 qPCR检测 采用Biorad公司的定量PCR仪 IQ5进行定量PCR反应。反应体系（20 μL）：2×PCR缓冲液10 μL、RT产物1μl、5 μmol/L miRNA特异性PCR引物0.4 μL、5 U/μL Taq酶 0.2 μl、无酶水加至20 μL。反应条件： 先95℃ 3 min，然后95℃ 12 s、62℃ 35 s，共40个循环。miR-185的相对表达量通过公式2-△Ct计算，其中， Ct=miR-185平均Ct值-U6平均Ct值。 　　1.4 统计学分析 采用统计软件SPSS 13.0进行统计学分析，结果以（x±s）表示，两组间比较采用t检验。当分析miR-185的表达水平与患者预后关系，采用Kaplan-Meier生存曲线分析。P0.05被认为差异具有统计学意义。 　　2结果 　　2.1 miR-185在卵巢癌组织中的表达情况 提取37例卵巢癌组织以及相应对照正常组织总RNA，运用qRT-PCR检测miR-185正常正常组织和卵巢癌组织中的表达情况，在目的基因与内参照基因扩增效率相同的情况下，测定循环阈值（Ct值），2-△Ct表示miR-185的相对表达量。结果显示，与对照正常上皮组织相比，miR-185在卵巢癌组织表达普遍下调。卵巢癌组织中miR-185平均表达量明显低于对照正常组织，分别为（0.22±0.02）、（0.74±0.09），差异具有统计学意义（P0.01）。 　　2.2 miR-185表达水平与卵巢癌临床病理参数之间的关系 miR-185在卵巢癌临床Ⅲ/Ⅳ期、Ⅰ/Ⅱ期表达值分别为（0.