MiR—34a在鼻咽癌中的表达及其临床意义.docVIP

MiR—34a在鼻咽癌中的表达及其临床意义 　　摘要：目的 研究miR-34a在鼻咽癌组织中的表达并探讨其临床意义。方法 收集鼻咽癌活检组织标本30例，15例正常及慢性炎症鼻咽粘膜活检组织作为对照，采用qRT-PCR检测鼻咽癌组织及对照组织中miR-34a的表达情况，分析miR-34a表达水平与鼻咽癌临床病理参数之间的关系。结果 与对照鼻咽粘膜组织相比，miR-34a在鼻咽癌组织表达普遍下调。鼻咽癌组织中miR-34a平均表达量明显低于对照鼻咽上皮组织，差异具有统计学意义（P0.05），对照鼻咽粘膜组织中miR-34a平均表达量约为鼻咽癌的3.7倍。临床Ⅲ/Ⅳ鼻咽癌miR-34a表达水平明显低于临床Ⅰ/Ⅱ鼻咽癌组织 （P0.05）；有转移的鼻咽癌组织显著低于无淋巴结转移的鼻咽癌（P0.05）。结论 miR-34a与鼻咽癌的发生、临床进展及预后密切相关，它可能是鼻咽癌新的潜在的治疗靶点及诊断预后分子标志物。 　　关键词：鼻咽癌；miR-34a；临床进展 　　研究显示，miR-34a在结直肠癌、前列腺癌、肝癌、肺癌、胶质瘤等肿瘤组织和细胞中表达下调，且过表达miR-34a能抑制多种肿瘤的生长、侵袭与转移，在肿瘤的发生发展发挥重要作用[1-3]。这些结果均表明miR-34a在一些肿瘤中是一个具有抑瘤功能的miRNA。但目前miR-34a在鼻咽癌的生物学功能并不清楚。本研究通过qRT-PCR技术检测miR-34a在鼻咽癌组织与对照鼻咽粘膜组织（包括正常及炎症粘膜组织）中表达情况，并探讨miR-34a与鼻咽癌临床分期、转移等临床参数之间的关系，从而为进一步揭示鼻咽癌发病机理和寻找新的诊断及预后分子标志物提供实验依据。 　　1资料与方法 　　1.1标本收集 标本均取自于南华大学附属二医院医院2006年7月～2013年10月鼻咽癌患者和正常及慢性炎症鼻咽粘膜（对照）活检组织标本，组织立即放于液氮或-80°冰箱保存。所有组织标本活检后均经病理学诊断确认。其中鼻咽癌组织30例，正常及慢性鼻咽炎粘膜组织15例。 　　1.2 RNA提取、逆转录 常规Trizol试剂（Invitrogen公司）抽提总RNA，DEPC水溶解沉淀。紫外分光光度计测定RNA提取液的A260及A280吸光度值，检测RNA纯度和浓度。 　　逆转录反应按转录miRNA逆转录试剂盒（吉玛生物公司）说明书进行。 　　1.3定量PCR检测 采用SYBR方法，应用Biorad公司的定量PCR仪 IQ5进行定量PCR反应。miR-34a的相对表达量通过公式2-△Ct计算，其中， Ct=miR-34a平均Ct值-U6平均Ct值。 　　1.4统计学分析 采用统计软件SPSS 16.0进行统计学分析，结果以x±s表示，两组间比较采用t检验。P0.05被认为差异具有统计学意义。 　　2结果 　　2.1鼻咽癌组织中miR-34a表达明显下调 运用qRT-PCR检测miR-34a鼻咽癌组织及对照鼻咽粘膜组织中的表达情况，结果显示，与对照鼻咽上皮组织相比，miR-34a在鼻咽癌组织表达普遍下调。鼻咽癌组织中miR-34a平均表达量明显低于对照鼻咽粘膜组织，分别为（1.07±0.13）、（3.81±0.52），差异具有统计学意义（P0.01），对照鼻咽粘膜组织miR-34a平均表达量约为鼻咽癌组织中的3.7倍。 　　2.2 miR-34a表达水平与鼻咽癌临床病理参数之间的关系 统计分析显示，临床Ⅲ/Ⅳ鼻咽癌miR-34a表达水平明显低于临床Ⅰ/Ⅱ鼻咽癌组织，差异有统计学意义（P0.05）；有转移的鼻咽癌组织明显低于无淋巴结转移的鼻咽癌 （P0.05），表明miR-34a表达与鼻咽癌临床进展及转移呈负相关；此外，miR-34a的表达水平与鼻咽癌患者年龄及性别无关，差异无统计学意义。 　　3讨论 　　近年来，miRNA成为分子生物学研究的焦点。miRNA是一类含量丰富且高度保守的非编码内源性小RNA分子，通过与靶基因mRNA的3′非编码区完全或不完全结合，抑制蛋白的合成或者诱导靶基因的降解，从而在转录后水平对靶基因的表达进行负性调控[4]。miRNA 调控细胞分裂、分化与调亡等重要生物学过程，并且，高通量miRNA芯片检测证实其在恶性肿瘤中表达异常。研究表明，miRNA参与鼻咽癌的发生发展，起着癌基因或抑癌基因样作用，与鼻咽癌诊断、预后和疗效评估相关。 　　关于miR-34a已有很多研究，miR-34a可通过抑制CD44表达而抑制前列腺癌和前列腺癌干细胞的再生和转移，从而起到治疗前列腺癌的作用[5]。miR-34a可通过抑制c-Myc的表达从而抑制肾细胞癌的增殖[6]。Wu等报道miR-34a可通过抑制Fra-1的表达而抑制结肠癌的迁移和侵袭[1]。综合这些研究可以看出miR-3