2 样品制备型生物芯片.doc

§2 样品制备型生物芯片 样品制备是任何一个完整的生物和医学分析检测过程都必须经历的一个起始程序，在生物芯片上进行检测分析也不例外。如果不实现样品制备，后续的生化反应和检测分析就无从谈起。比如，要对病人血样中的核酸进行PCR扩增以进行疾病诊断，就必须先将有核的白细胞与无核的红细胞分离，因为红细胞所含的血红蛋白对DNA 的PCR反应有抑制作用。所以样品制备是生物研究和医学检测等分析过程必不可少的一个起始环节。 样品制备型生物芯片就是生物芯片技术领域用于执行样品制备功能的微型器件，其目的就是从粗级生物样品中分离或提取目的物质（如细胞、蛋白质、DNA、RNA等），并完成样品试剂的混合、标记等任务，使之适用于直接的生物信息检测。 2.1 传统的样品制备技术 由于生物样品的复杂性和多样性，目前实验室内用于进行样品制备的技术也是异彩纷呈，各有自己的特色和使用范围。在生物样品制备过程中通常涉及的操作主要有样品分离、破胞、样品试剂混合、样品标记、单细胞捕获等。 2.1.1 分离技术 生物样品分离是样品制备中用得很普遍的一个操作，目前生物实验室常用的对细胞等颗粒的操纵技术离心、过滤、、荧光流式细胞计、磁流式细胞计等等。这些方法利用生物大分子的物理化学性质如：比重、大小、电荷、折射率及表面免疫标志等，实现从液样中收集细胞及从细胞混合体中识别、分离目标细胞。荧光标记法、生物素标记法、同位素标记法在微芯片反应池中完成对目标DNA分子的扩增反应及在微型通道中完成的毛细管电泳分子分离。然而， 样品制备芯片的另一个重要性体现在缩微芯片实验室的发展方面。众所周知，生物芯片发展的最高境界是成为缩微芯片实验室，即将从样品制备到结果检测整个生物研究和医学检测的过程在一块芯片上完成。由于目前在生化反应和信号检测部分的微型化、集成化和自动化已有一定基础，甚至在这方面已有商业化的产品问世，如Agilent公司的Agilent 2100 Bioanalyzer。所以真正阻碍生物芯片技术向微型化、集成化、自动化发展的环节就是样品制备芯片技术的滞后。可以说样品制备是制约生物芯片技术发展的“瓶颈”。只有实现样品制备芯片技术的突破，才能使生物芯片技术迈上一个新的台阶。 2.3 样品制备型生物芯片制备方法： 样品制备型生物芯片通常由一些微通道、微腔体构成，根据其所需执行的特定功能和任务，可能还会包含其它一些组件，如电极、加热片、冷却器、滤膜、压电陶瓷片等等，从而可以用来执行一定的样品制备功能，如PCR反应、免疫分析反应、蛋白质消化、电泳分离、细胞分离、细胞降解、样品试剂混合等。 样品制备芯片的制备借用的是微电子工业和其他加工工业中比较成熟的微细加工工艺，如光学掩模光刻技术、反应离子蚀刻、微注入和聚合膜浇注法等，在玻璃、塑料、硅片等基底材料上加工出用于生物样品分离反应的微米尺寸的微结构如过滤器、反应室、微泵、微阀等微结构。2.4.1样品采集芯片 样品收集芯片的作用是获取粗级样品，这一步骤可能并不是每个实验过程都需要。但是对于有些悬浮于液体或者气体中的样品来说，可能往往要经过这样一个收集过程。比如，要监测空气中的病菌情况和战场上的生化武器时，就必须有一个易于携带的方便快速的样品收集装置。 加州理工大学的Lee等人利用微机电技术设计了一个自动收集空气中微粒的微型收集器1。该微型自动收集器实际上是一层薄的滤膜，上面制作了一系列微孔阵列和驱动电极阵列。它的工作原理是：通过装在微型滤膜下的CPU风扇产生抽吸气流，抽吸气流带动滤膜上空的空气及空气中的微粒一起向下运动，当空气中的微粒经过滤膜时被截留捕获。然后通过在滤膜的电极阵列上加载三相行波电压产生介电电泳力将滤膜上的微粒运送到收集池，以备后续的分析检测之用。该系统设计的微孔尺寸可收集大小为5～10微米的微粒，微滤膜结构的如下图所示。这一系统优势在于实现了空气中样品收集的自动化，因而在空气质量监测、生物武器侦测等野外实地生物样品检测分析方面有很好的应用前景。 另外Lee等人还将该装置做了进一步的延伸设计，制作了一种所谓的“从空气到液体”的微型生物颗粒收集器2。这种微型器件是用玻璃和PDMS（一种高分子聚合物）制作的，主要结构由一些微通道组成，工作时通过外加的泵和阀使微通道中液柱的弯月面进行振荡运动，当液面到达颗粒入口处时，从空气中收集的颗粒便溶入液体中。然后通过泵将液体回吸进入样品处理池以进行后续操作。 2.4.2细胞分离芯片： 生命的基本单元——细胞及其内容物始终是生物和医学研究的主题。不管是研究细胞本身还是研究其中的DNA、RNA或者蛋白质，研究者首先要做的第一步就是将目的细胞从组织混合物中分离提取出来，如从血液中分离白细胞或者癌细胞等。目前生物实验室常用的离心、过滤、光钳、流式细胞计等等但它们不尽适于在生物芯片上应用。理想的操纵应可在微