口服复方丹参滴丸血清中丹参相关成分的LC／MS检测.docVIP

中药新药与临床药理.2000，11（3）：141-142 口服复方丹参滴丸血清中丹参相关成分的LC／MS检测 王宁生， 宓惠卿， 洪 馨， 欧卫平 （广州中医药大学 临床药理研究所，广州 510405） 摘 要：以LC／MS联用检测技术及与标准品对照的方法，分离检测健康志愿者口服丹参滴丸后血清中丹参相关的一些水溶性成分及代谢产物。研究结果表明，对复杂的中药复方及复方的体内代谢产物仅用一级质谱（LC／MS）分析检测有其局限性．尚须进一步用多级质谱 LC／MSn 加以检测、确证。 关键词：＠复方丹参滴丸／分析；＠复方丹参滴丸／药代动力学；＠血清药理学；＠质谱分析 中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1003-9783 2000 03-0141-02 复方丹参滴丸是临床上常用的治疗冠心病药物．具有扩张冠脉，增加血流量，增强心肌收缩力．改善心脏功能，抗血小板表面活性及聚集和降低血脂等作用。滴丸中的丹参活性成分有两类，一类是脂溶性的二萜醌类，具有抗茵、抗炎及扩张血管作用，另一类为水溶性的酚酸类化合物，具有抗炎、溶纤，改善血液循环，抗氧化损伤作用。丹参相关成分的体外研究已有较多的报导[1、2、4]，但这些成分在体内有何变化，尚未见相关报道。本文报道健康志愿者口服复方丹参滴丸后，采用LC／MS联用检测技术，与健康志愿者空白血清及已知的丹参水活性相关成分对照，比较和研究了制剂中丹参水溶性相关成分在体内的情况。 材料和方法 1．1 药物 复方丹参滴丸，天津天使力联合制药公司产品，批号座机电话号码5。 给药方法与剂量 男性健康志愿者口服给药 250mg/60kg体重，25mg／粒 。 采血及血样处理 药前 空白 和药后l h采静脉血，分离血清；O.5mL血清加等量甲醇 色谱醇 ，离心15min，分离上清液，进样分析。 1．4 标准品 丹参素，原儿茶醛，香草酸由中国药品生物制品检定所提供。 1 5 仪器及分析条件 液相色谱—质谱联用仪 Model LCQ Finnigan 美国 配有ESI E1ectrospray Ionization 源及LCQ l.2数据处理系统。 HPLC条件：Spherisorb C18 5μm 4.6mmx 250 mm分折柱。流动相：MeoH：H2O＝80：20 V／V 。流速：1.O ML/min。 质谱分析条件：电喷雾质谱正／负离子检测，离子源喷射电压4.25kV，毛细管温度180℃，毛细管电压+／-6.50V,鞘气流速60流量单位 AU ，辅助气流速5AU。 结 果 HPLC／MS总离子流图 TIC 。 丹参相关成分的准分子离子峰 在 +／- ESI-MS全扫描一级质谱条件下，测得血清中丹参一些相关成分的准分子离子峰分别为m/z-197，-277,-137,-313，-493，-167；其中m/z-197，-137，-493，-167分别与标准对照品丹参素，原儿茶醛，丹酚酸A，香草酸的质荷比相符[M-H]-。根据上述结果推测，m/z-277和-313，有可能分别为丹参素硫酸结合物[M-H]-及原儿荼醛葡萄糖醛酸结合物[M-H]-。 血清中未检测到原儿茶酸，但测得有香草酸，这可能与原儿茶酸在体内较快代谢 甲基化 成为香草酸有关。有文献报道[1]，原儿茶酸在体内有两种代谢途径，其一为甲基化，生成香草酸，另一为脱羧，生成原儿茶酚。 讨论 复方丹参滴丸是复方丹参片的新剂型，被列为国家中药保护品种，正申请进入国际市场。尽管已有许多研究工作和临床实践证实丹参、三七、冰片的药理作用及三味药组成的复方丹参制剂的临床疗效，但其在体内的变化和复方中药物的相互作用仍是个未知数，使得复方丹参滴丸作用的物质基础和作用机理的深入研究存在困难，也对复方丹参滴丸顺利进入国际市场造成障碍。 药物在体内代谢的第II相反应，与葡萄糖醛酸结合反应的军团除酚、醇经基、羧基外，尚有氨基、巯基和烯醇结构也可作为结合受体；与硫酸结合这类反应在人和哺乳动物中较为常见，结合的基团包括酚和醇类的羟基、芳香胺类的氨基。丹参素 C9H10O5,M 198 、原儿茶醛是丹参水溶性成分中的主要药效成分[2]，结构中都含有较多的酚羟基 图4 。本研究只是从一级质谱的分子离子峰及根据药物在体内代谢一般规律推测丹参素及原儿茶醛体内产生的结合物。这些活性成分在体内的代谢变化，仅用一级质谱检定分析是不够的，应进一步用多级质谱 MSn 加以检测和确认。 LC／MSn 联用技术实际上是以质谱 MS 为检测手段的色谱技术，它集液相色谱 LC 的高分离能力和MS的高灵敏度、极强的定性专属特异性于一体，成为药物代谢研究中其他方法所不能取代的工具。在药物代谢研究中．尤其是因代谢物的浓度低、难以提取纯品进行结构鉴定时，应用LC／MSn技术可对有关成分进