食品安检技术思考题.docVIP

2.比较速测卡法和酶抑制率的异同。 答：共同点：两种方法的原理、缓冲（提取）溶液pH值、测定中的干扰物质和排除方法基本相同。不同点：速测卡法检出限：在使用速测卡法检出蔬菜样品为农药阳性时，即可视为有机磷或氨基甲酸酯类的农药已超标。在有条件的单位，可用气相色谱仪或质谱仪对阳性试样进行进一步的实验；酶抑制率法的选择：在气相色谱分析仪还未问世时，对有机磷类农药的检测即采取了酶抑制率法，只是由于当时酶的纯度不够高、灵敏度较低、酶试剂保存期短、及方法不能区分出具体的农药而被气相色谱法所取代。而今用其作为快速分析则恰到好处。只是现在酶试剂的质量还应进一步提高，有效保存期应设法延长。因此，在实验前，必需测试酶的活性，达到要求后才能往下进行。相比之下，速测卡法操作简单、使用方便，常温下试药的有效期可达一年；酶抑制率法操作要烦琐些，夏天时，试药需要冷藏运输，但以数字形式读取数据，较为直观。 3.简述各种农药残留的快速检测方法在实践中的应用. 答：（1）当样品类型为蔬菜时，在市场，车站，乡镇等地现场检测：当检测灵敏度要求低时，用速测卡法检测，当检测灵敏度要求高时，用速测卡法进行初检检，然后用酶抑制法进行复检；采集样品带回实验室检测就直接采用酶抑制法。 2 样品类型为茶叶，肉等，直接采用酶抑制法。 由此可看出，速测卡法快速筛选，方法精度低，检测速度快；酶抑制快速筛选并提供总量抑制率指标，方法精度比速测卡高，检测速度较慢。 4.影响速测卡法和酶抑制率法测定农药残留准确性的因素有哪些？如何减少其影响？ 答：（1）酶剂失去活性或生理活性下降。实验前需判断酶品是否过了有效期，确保它的活性，并控制酶的反应条件（适合反应的温度，PH）和贮存条件。（2）样品放置的时间。样品放置的时间应与空白对照卡放置时间一致才有可比性，样品加液后的放置延长时间应以空白对照卡用手指捏3min时可变蓝来确定。（3）样品测定方法不合适。酶抑制率法测定农药残留时，叶绿素含量高的蔬菜，或者蔬菜中含有较多可使酶失活的成分，如韭菜，辣椒，葱，姜等，应整株浸提，且浸提时间不能太久。（4）实验者操作因素。实验步骤出错，或者不恰当地使用农药残留速测仪和分光光度计，都会影响最后结果的准确性。实验者应该秉着认真，细心的态度，减少人为带来的主观因素对实验结果的影响。（5）实验室的卫生环境条件。速测卡很是敏感，如果实验者，实验用具沾有微量农药，或周边环境喷洒浓药等，都会造成假阳性的产生。所以实验前，应该认真检查是否存在这些状况。 二.对虾中氯霉素含量的酶联免疫吸附试验法检测（包括盐酸克伦特罗） 1.影响酶联免疫吸附法检测虾中氯霉素含量准确性的因素可能有哪些？ 答：（1）温度。温度影响酶的活性，在一定温度范围内，随着温度上升，酶活性上升。各试剂如氯霉素标准溶液，浓缩萃取稀释液，酶标记物，底物溶液等以及微量测试孔条应置于室温下，回温30min。（2）洗涤不充分。残余酶标记抗原会影响底物与酶作用显色的结果，使得最终的反应显色比正常显色淡。 3 温育时间。温育时置于暗处，温育时间不够，随意取出会使得NaSi过氧化物酶遇光易分解，使得反应不充分进行，影响最后的结果。（4）其他微孔的污染。加样品或试剂时枪头接触微孔，或微孔间不同浓度样液的污染，另外加样时溅出微孔外，造成样品量的减少。（5）酶剂过了保存有效期，生理活性下降，或者贮存条件不当，导致失活，使得底物不能被酶催化显色。（6）样品制备过程操作不当。60%以上的误差都是由样品前处理导致的，而ELISA法测定虾中氯霉素含量是不仅是定性而且是定量的实验，称取量和试剂用量都要求精确，如洗涤是否彻底，操作步骤应尽可能准确，规范。 2.实验中，为什么样品中氯霉素含量与显色呈反比？ 答：氯霉素与酶标抗原竞争与抗体结合，氯霉素含量越多，与抗体相结合的数量就越多，而酶标抗原与抗体结合的数量则变少，残留的酶标抗原就会被洗涤掉，酶催化底物显色就少。说明样品中氯霉素含量与显色呈反比。 3. 计算结果时，本试验样品的稀释倍数是多少？为什么？ 答：取6g的虾肉，加入6ml乙酸乙酯提取，然后再从中取出2ml，其量即是：6g/6ml *2ml 2g。又加入原倍萃取稀释液0.5ml，即有公式2g/0.5ml 4倍。 4. 如果洗涤不彻底会给实验结果造成怎样的影响？为什么？ 答：洗涤不彻底就会残留多余的酶标记物，加底物后，催化底物多，显色深，吸光度值大，得到的结果氯霉素的含量偏少，造成实验结果的不准确，偏差大。从而无法根据颜色的深浅进行定性和定量分析。 6. 简述肉制品中盐酸克伦特罗的主要检测方法 答：1 GS/MS法：固体样品剪碎，用高氯酸溶液匀浆。若为液体试样，则加入高氯酸溶液，进行超声加热提取，用异丙醇+乙酸乙酯（40+60）萃取，有机相浓缩，经弱阳离子交换柱进行分离，用乙醇+浓氨水（9