295例宫颈病变患者HPV亚型多重感染与宫颈病变的关系.docVIP

295例宫颈病变患者HPV亚型多重感染与宫颈病变的关系 　　[摘要] 目的 探讨人乳头瘤病毒（HPV）不同亚型多重感染与宫颈病变的关系。 方法 采用基因芯片技术对手术切除宫颈石蜡组织及液基细胞技术所获宫颈脱落细胞进行基因分型检查，同时检测其宫颈病变程度。 结果 295例宫颈病变样本总的HPV阳性率为58.98%（174/295）。仅感染高危HPV或高、低混合型HPV组的宫颈病变程度构成比与仅感染低危型HPV组的对应构成比差异有统计学意义（x2=16.801，P0.05； x2=4.362，P0.05）；单一高、低危亚型之间有统计学差异（x2=16.369，P0.05）。 结论 高危型HPV感染增加了宫颈癌的患病风险，而多重感染并未促进宫颈病变的发展。 　　[关键词] 人乳头瘤病毒；基因芯片技术；宫颈癌 　　[中图分类号] R711.74 [文献标识码] B [文章编号] 2095-0616（2013）18-07-03 　　宫颈癌的发生率和致死率在女性恶性肿瘤中位居第2位。目前认为持续的高危型人乳头瘤病毒（human papillomaviurs，HPV）感染是导致高度宫颈上皮内瘤变，以及进一步发展为宫颈癌的重要因素[1-2]。临床基因分型检测中，HPV的感染常常会出现单纯高危型单一或多重感染，单纯低危型单一或多重感染，以及高、低危混合型多重感染等多种类型。迄今，HPV病毒的多重感染与宫颈病变的发展进程，以及宫颈癌的发生是否存在相关性还存在争论[3-8]。本研究通过基因芯片技术，对295例不同宫颈病变样本进行HPV基因分型检测，探讨HPV病毒不同亚型多重感染与宫颈病变程度的关系。 　　1 对象与方法 　　1.1 研究对象 　　2011年5月～2013年3月，年龄20～70周岁，在四川省泸州医学院附属医院、富顺县人民医院、富顺县妇幼保健院就诊及手术切除的295例富顺地区宫颈病变患者（宫颈脱落细胞样本155例，石蜡样本140例）为研究对象。 　　1.2 研究方法 　　1.2.1 标本采集及HPV感染类型分组 TCT技术如姚军等[5，9]所述。石蜡样本取自泸州医学院附属医院病理科及富顺县人民医院病理科库。样本分为7组，A组：仅感染高危型HPV（包括单一亚型和多重亚型混合感染）；B组：仅感染低危型HPV（包括单一亚型和多重亚型混合感染）；C组：高、低危混合感染。将多重HPV感染样本分为D组（仅感染多种高危亚型）和E组（仅感染多种低危亚型）；将单一HPV感染样本分为F组（仅感染一种高危亚型）和G组（仅感染一种低危亚型）。 　　1.2.2 GPMT W2600基因芯片分型检测系统 该系统可以同时检测16种高危型及8种低危型HPV亚型，由北京金菩嘉有限责任公司提供。 　　1.2.3 DNA提取及PCR扩增 DNA提取按常规方法，如代红莹等[4-6]所述。PCR扩增条件为：50℃ 2min ，94℃ 4min；扩增28个循环： 94℃ 30s→48℃ 45s→72℃ 20s；加25个循环：94℃ 30s→65℃ 45s→72℃ 20s。 　　1.2.4 变性杂交 向每管样本扩增产物中加入已扩增好的阳性对照20μL；再加入60μL杂交缓冲液，震荡混匀后瞬时离心；95℃变性5min。 　　1.2.5 基因分型分析 按照基因分析仪器（GPMT W2600）操作步骤及其芯片阅读仪控制软件2.0对样本进行检测和分析。 　　1.2.6 结果判读 结果有效：阳性对照流池的信号值≥40m。且阴性对照流池信号值40m。则可认定为结果有效。分型探针检测阳性：探针信号值≥40m。分型探针检测阴性：分型探针信号值40m。。 　　1.3 统计学方法 　　采用Microsoft Excel 2003和SPSS13.0软件进行数据处理和统计分析，P0.05为差异有统计学意义。 　　2 结果 　　2.1 单纯高、低危HPV亚型感染，以及高、低危HPV混合感染间的关系 　　295例宫颈病变患者中174例感染了HPV病毒，感染率为58.98%（174/295）。仅感染高危HPV（A组）或高、低混合型HPV组（B组）的宫颈病变程度构成比与仅感染低危型HPV（ C组）的对应构成比存在显著性差异（x2=16.801，P0.05）。详见表1。 　　2.2 HPV多重感染与宫颈病变类型的关系 　　仅高危多重感染（D组）或仅低危多重（E组）HPV组分别与仅高危单一（F组）、仅低危单一（G组）HPV组之间，其宫颈病变程度的构成比无统计学意义（x2=7.325，P0.05； x2=4.362，P0.05）；单一高（F组）、低危（G组）亚型之间有统计学差异（x2=16.369，P0.05）。详见表2。 　　3 讨论 　　人乳头瘤病毒是一种双链闭环无包膜的