石蜡包埋组织样品制备方法.docVIP

石蜡包埋样品制备方法操作依据组织大小及致密程度而定 1、组织的采集、固定和保存： 采取组织后，4%多聚甲醛（4%PFA）4 C 固定1小时或过夜，PBS缓冲液洗三次，每次10min至1小时，于30%、50%乙醇各10 min至1小时，4 C保存于70%乙醇中。 2、组织的包埋切片：： 固定后的样品经梯度乙醇脱水、二甲苯透明，52-54 C石蜡包埋，常规切片，切片厚4 -10 m，贴于处理过的干净载玻片上，34 C烤片过夜，之后收集于载片盒中，4 C密封保存。 石蜡包埋： 保存于4 C 70%乙醇中的组织样品 80%乙醇 15 min 95%乙醇 15 min 100%乙醇 15min 2 1/2乙醇1/2二甲苯 15 min 二甲苯透明 5-10 min 1/2二甲苯1/2石蜡 30 min 石蜡（1） 1.5hr 石蜡（2） 1.5-2.5hr 石蜡（3） 包埋 4 C保存 密封保存于4 C的组织切片 二甲苯 1 10 min 二甲苯 2 10 min 二甲苯 3 10 min 1/2二甲苯1/2乙醇 15 min 100%乙醇 5 min 95%乙醇 5 min 80%乙醇 5 min 70%乙醇5 min 50%乙醇 5 min 30%乙醇 5 min H2O 5 min 4、石蜡组织切片的HE染色： 切片经二甲苯脱蜡、梯度乙醇复