PCR引物设计汇总.pptVIP

PCR 引物设计 PCR primer express 聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction ,PCR)体外核酸扩增技术 能在一个试管内将所要研究微量的目的基因或某一DNA片段于数小时内扩增至十万乃至百万倍,使肉眼能直接观察和判断。 PCR使人们能通过试管内的数小时的反应将特定的DNA片段扩增数百万倍。该技术已成为分子生物学研究的重要技术体系，其建立极大地推动了生命科学的研究进展。在DNA重组与表达、基因结构分析与功能检测具有重要的应用价值。 1. PCR的基本原理 PCR的原理是根据待测DNA片段两端的核苷酸序列，设计并人工合成两个分别与DNA片段两端互补的寡聚核苷酸引物，在有过量的引物、过量的底物（4种dNTP）、DNA聚合酶以及模板的反应体系中，经过高温变性、低温退火和适温延伸三个阶段的循环周期，对DNA分子进行扩增。 由于新合成的DNA双链能够作为下一循环的模板，所以模板DNA以几何级扩增。一般经过30-35次扩增循环，可使目的基因DNA片段放大数百万倍。 2. PCR体系的主要成分 （1）模板 单、双链DNA均可。 不能混有蛋白酶，特别是染色体中的组蛋白、核酸酶、DNA聚合酶抑制剂、DNA结合蛋白类。 一般100ng DNA模板/100?L。 模板浓度过高会导致反应的非特异性增加。 （2）引物浓度 0.1-0.5 ?mol/L 浓度过