必修二生物总复第3章 第1节.ppt

走进实验室 基础再现 实验课题：DNA的粗提取和鉴定  1.血细胞在蒸馏水中会因渗透吸水过度而导致细胞膜和细胞核膜的破裂，利用此特性可得到含有DNA的溶液。 2.DNA在氯化钠溶液中的溶解度，是随着氯化钠的浓度的变化而改变的。当氯化钠的物质的量浓度为0.14 mol／L时，DNA的溶解度最低。利用这一原理，可以使溶解在氯化钠溶液中的DNA析出。 3. DNA不溶于酒精溶液，但细胞中的某些物质则可以溶于酒精，利用这一原理，可以进一步提取出含杂质较少的DNA。 4.DNA遇二苯胺(沸水浴)会染成蓝色，因此，二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。 DNA+ 冰醋酸 少量浓硫酸 + 100℃ 蓝色物质 二苯胺 二、材料用具 1.材料 鸡血细胞液、预冷的95%的酒精溶液、蒸馏水、质量浓度为0.1 g／mL的柠檬酸钠溶液、物质的量浓度分别为2 mol/L和0.015 mol/L的氯化钠溶液、二苯胺试剂。 2.用具 铁架台、铁环、镊子、三角架、酒精灯、石棉网、载玻片、玻璃棒、滤纸、滴管、量筒、烧杯(不同大小)、试管、漏斗、试管夹、纱布。 三、知识归纳 1.(1)提取鸡血细胞的细胞核物质，应用低渗原理和机械搅拌得到最大量的DNA。 (2)析出含DNA的黏稠物，加蒸馏水时要慢慢，搅拌时要轻轻，否则实验会失败。 (3)沉淀DNA时必须用冷酒精。 2.DNA的提取，关键是对杂质的去除，由于上清液是血液中的血浆部分，不含DNA，所以要除去上清液(含有蛋白质)。 3.实验中出现的丝状物是肉眼可以观察到的，这种丝状物的直径要比DNA分子的直径2 nm大许多倍，所以实验中出现的丝状物的粗细并不表示一个DNA分子直径的大小。 实验结论:细胞中有DNA，DNA与二苯胺试剂在沸水浴中变蓝色。 四、思维拓展 1.实验材料除鸡血细胞外，从理论上讲只要有细胞核的生物组织均可，如菜花、动物肝脏等，只是操作较复杂，有兴趣的同学也可以试一试。 2.缩短实验操作时间的建议 (1)在实验中有三次用放有纱布的漏斗过滤(分别是单层、多层和两层纱布)，改用直接将纱布覆盖在烧杯口过滤。 (2)在鉴定DNA时，可用二苯胺试剂直接滴在玻棒上的丝状物上，呈现蓝绿色，即证明DNA的存在。 3.DNA遇二苯胺试剂呈蓝色，遇甲基绿呈绿色，都是特异性显色反应，故二苯胺和甲基绿均可用于鉴定DNA。 过程设计 1．材料制备 0.1 g/mL柠檬酸钠100 mL 活鸡血180 mL 500 mL烧杯→玻璃棒搅拌→1000 r/min离心2 min→吸去上清液→ 即得鸡血细胞液（也可将上述烧杯置于冰箱中，静置一天使鸡血细胞自行沉淀） 2．方法步骤 （1）提取血细胞核物质 取血细胞液5~10 mL＋20 mL蒸馏 水，玻璃棒沿一个方向快速搅 拌，纱布过滤，滤液中含DNA 和其他核物质，如蛋白质 原理：血细胞的细胞膜、核膜吸水 涨破，玻璃棒快速搅拌， 机械加速血细胞破裂 （2）溶解核内DNA：滤液＋2 mol/L NaCl溶液40 mL，玻璃棒沿一个方向搅拌 （3）析出含DNA的粘稠物： 向上述溶液中缓缓加入蒸馏水，并轻轻地沿一个方向搅拌，出现丝状物，当丝状物不再增加时，停止加水（此时NaCl溶液相当于稀释到0．14 mol/L） （4）滤取含DNA的粘稠物： 用多层纱布过滤，含DNA的粘稠物留在纱布上 （5）DNA粘稠物再溶解 20 mL 2 mol/L NaCl溶液上述粘稠物 50 mL烧杯，缓慢搅拌3 min （6）过滤含DNA的2 mol/L NaCl溶液： 用2层纱布过滤，滤液中含DNA （7）提取含杂质较少的DNA： 上述溶液＋95%酒精，缓慢搅拌，出现乳白色丝状物，用玻璃棒将丝装物卷起 （8）DNA鉴定 3.图解过程 Ⅰ.提取血细胞(柠檬酸钠、离心) Ⅱ.提取核物质(蒸馏水、过滤) Ⅲ.用NaCl提取DNA(NaCl、过滤) Ⅳ.用酒精提取DNA(酒精、过滤) Ⅴ.用二苯胺鉴定DNA(二苯胺试剂) 整个实验共“三次过滤，两次析出，五次搅拌”。 易错归纳 1.血细胞液加水后，必须充分搅拌(不少于5 min)，否则血细胞核就不会充分破碎，溶解出的DNA就会减少。过滤时采用单层纱布。 2.当NaCl溶液加入至血细胞滤液中之后，必须充分晃动烧杯，使二者混合均匀。这样才能使DNA充分溶解于浓NaCl溶液中。 3.所用酒精必须是充分预冷(在冰箱中5 ℃以下冷却24 h以上)才能使用。冷酒精与含DNA的NaCl溶液的体积比是2∶1。提取DNA丝