第十六章DNA和RNA合成修饰酶.doc

第二章 DNA和RNA合成修饰酶 一、填空题 1． 连接酶(Hgase)是一类用于核酸分子连接形成——键的核酸合成酶，有 DNA连接酶和RNA连接酶之分。 2． 原核生物主要有两种类型的DNA连接酶：E.Coli DNA连接酶和T4DNA连接酶。 基因工程中使用的主要是T4 DNA连接酶，它是从T4噬菌体感染的E.coli中分离的 一种单链多肽酶，分子量为——kDa，由T4噬菌体基因——编码。E.coli DNA 连接酶是由大肠杆菌基因——编码，也是一条多肽链的单体，分子量为 ——————kDa。这两种DNA连接酶有两个重要的差异：第一是它们在催化反 应中所用的能量来源不同，T4 DNA连接酶用——， 而E.coli DNA连接酶 则用——作为能源。第二是它们催化平末端连接的能力不同，在正常情况下 只有T4DNA连接酶能够连接平末端，E.Coli DNA连接酶则不能。即使是调整反应 条件，E.coli DNA连接酶催化平末端的连接效率也只有T4 DNA连接酶 的——。 3． DNA连接酶的单位通常用Weiss单位表示，一个Weiss单位是：—— 4． DNA聚合酶I是——在1965年从大肠杆菌细胞中分离的，所以又称 为——聚合酶。该酶由大肠杆菌基因——编码，是一种单链球蛋白， 分子量为109kDa，酶蛋白中含有一个Zn原子。 5． T4 DNA聚合酶与Klenow酶一样，具有5’→3’聚合酶和3’→5’外切酶两种活性， 但是它的3’→5’外切酶的活性比Klenow酶强——倍。该酶的3’→5’外切活 性既能作用于单链DNA也能作用于双链DNA，不过作用于—————二链的活性 要强于——链。 6． 反向转录酶(reversetranscriptase)是由—————kDa和—————kDa两个亚单位 组成的二聚体，作用时以RNA为模板合成DNA。 7． 从小牛胸腺中分离纯化的末端转移酶催化的基本反应是将—— ——，同时释放出游离的无机磷。催化反应时不需——，但 需要引物，单链DNA是最好的引物，单链DNA受体的长度最短需有——个、 dNTP。具有3’突出末端的双链DNA也是较好的反应底物。二价离子和DNA末端 状态对催化反应影响较大，但是用——作为辅助离子，可以催化任何形式 的末端(突出的、隐含的、平齐的)加接单核苷酸，但突出的3’端效率较高。 以Mn2+ ／Mg2+作为辅助因子，只能在单链DNA或双链DNA的3’突出端加尾。 8． S1核酸酶(S1 nuclease)是从米曲霉(Aspergillus oryzae)中分离纯化的一种含——的 金属蛋白，分子量为32kDa,是一种耐热的酶(37～65℃)。 9． 在S1保护实验中， S1切割的温度有两种：20℃和45℃， 这是因为：在20℃时， 一；在45℃时，--------------------------------------------. 10.——————————技术可以用来鉴定DNA分子中与DNA结合蛋白相互作用 的特定序列。 11．真核生物有两种DNA连接酶，连接酶I主要是参与——，．而连接酶 Ⅱ则是参与——。 12．T4RNA连接酶是1972年发现的，并于1977年纯化。该酶是由T4噬菌体基因一----——编码，作用是不需要模板。它在体内的作用是参与T4噬菌体——， 它不参与DNA合成的连接，但在——中可能有作用。 13．DNA聚合酶I的Klenow大片段是用——切割DNA聚合酶I得到的分 子量为76kDa的大片段，具有两种酶活性： (1)——； (2)一的活性。 14．反向转录酶除具有以DNA和RNA为模板合成DNA的5’-→3’合成酶的活性外， 还具有4种酶的活性：(1)——；(2)——； (3)一；(4)——。 15．RNA连接酶作用时除了需要ATP和Mg2+外，还需要——。 16．DNA聚合酶I是一种单体酶，分子量为109kDa，它含有金属离子——。 17．为了防止DNA的自身环化，可用——脱去双链 DNA——————————————————。 18．T4单核苷酸激酶进行DNA片段的5’端标记时，主要是通过两种反应即—— ——和——。 19．CIP催化脱磷酸时有两种最适温度，一种是37℃，适用于——