论文名称(中文) 探讨登革病毒非结构性蛋白NS5之小泛素化修饰於病毒.docVIP

論文名稱 中文 探討登革病毒非結構性蛋白NS5之小泛素化修飾於病毒複製中所扮演的角色 論文名稱 英文 Study the role of SUMO modification of dengue virus nonstructural protein 5 in viral replication 研究生 中文 蘇展儀 研究生 英文 Chan-Yi Su 中文摘要 登革病毒 Dengue virus, DENV 屬黃熱病毒科 Flaviviridae ，為帶有一單股正向核醣核酸的蚊媒病毒。登革病毒的基因可藉由轉譯及後續蛋白酶裁切過程，產生出十個病毒蛋白，其中三個為結構蛋白 C, prM及Env ，另外七個為非結構蛋白，包括NS1、NS2A、NS2B、NS3、NS4A、NS4B及NS5。小泛素化 SUMOylation 為細胞中一種重要的蛋白質轉譯後修飾機制，參與許多細胞生理功能的調控，如蛋白質於細胞核質之分布、基因表現調控及訊息傳遞調控等等；此外有越來越多的研究指出，小泛素化修飾也參與在許多病毒感染的過程中。我們的研究發現，當細胞內小泛素化修飾過程中唯一的結合酵素Ubc9表現量改變時，登革病毒的複製能力也會受到影響，這意味著小泛素化修飾也參與在登革病毒的複製週期之中。為了進一步探討小泛素化修飾與登革病毒的複製的關係，我們藉由細胞內小泛素化分析 In vivo SUMOylation assay 、細胞外小泛素化分析 In vitro SUMOylation assay 及細胞內去小泛素化分析 In vivo de-SUMOylation assay 等實驗，確認登革病毒的非結構蛋白NS5，亦即病毒的核醣核酸複製酶，是唯一會被小泛素化系統所修飾的登革病毒非結構蛋白。此外，我們建構了一系列的NS5區域性剔除突變株，並且利用它們進行後續之細胞內小泛素化分析實驗，我們發現小泛素化蛋白是針對NS5的N端甲基轉移酶 methyltransferase 區段上離胺酸 lysines 進行修飾；從點突變的結果發現，N端甲基轉移酶區段上的小泛素化結合模體 SUMO-interacting motif, SIM 能夠影響小泛素化修飾NS5蛋白的能力。總結而論，我們的研究顯示，細胞中之小泛素化系統參與登革病毒的複製，我們亦發現登革病毒的NS5蛋白會被小泛素化系統所修飾。另外，NS5蛋白N端甲基轉移酶區段上的小泛素化結合模體的發現有助於我們接下來進一步探討NS5蛋白之小泛素化修飾如何調節登革病毒複製之分子機轉。 英文摘要 Dengue virus DENV is a single-stranded positive-sense RNA virus of the family Flaviviridae. The DENV genome encodes a single polyprotein precursor, which is processed into three structural proteins C, prM and E and seven nonstructural proteins NS1, NS2A, NS2B, NS4A, NS4B, and NS5 . SUMO Small ubiquitin-like modifier has been identified as a reversible post-translational protein modifier. SUMOylation regulates a wide variety of cellular processes and plays important roles for numerous viruses during infection. In this study, we found that overexpression of Ubc9, the sole E2-conjugating enzyme required for protein SUMOylation, enhanced DENV replication whereas its knockdown reduced virus replication, suggesting that SUMOylation pathway is involved in DENV life cycle. We next carried out in vivo SUMOylation assay to search for the potential viral SUMO target s . We found that DENV NS5 protein, the