论文名称(中文) 登革病毒需要透过诱发内质网压力活化自噬反应以及.docVIP

論文名稱 中文 登革病毒需要透過誘發內質網壓力活化自噬反應以及促進病毒複製 論文名稱 英文 Dengue virus-induced ER stress is required for autophagy activation and viral replication 研究生 中文 郭思含 研究生 英文 Szu-Han Kuo 中文摘要 內質網是個與核膜相連的重要的胞器，負責蛋白質的合成與摺疊，同時也扮演著調控細胞內部離子恆定的角色。一旦內質網的恆定受到破壞時，就會產生內質網壓力 ER stress ，若細胞持續處在ER stress下，最終會導致細胞凋亡 apoptosis 。生物體發展出unfolded protein response UPR 的機制用以緩和ER stress以防止細胞死亡。UPR包括PERK、IRE1以及ATF6三條訊息傳遞路徑，目的都是要減少ER stress使細胞能繼續存活。先前研究指出，登革病毒 DV 感染不只會引起ER stress的產生，且會有順序性的調控三條UPR訊息傳遞路徑，最早活化的是PERK，接著是IRE1最後才是ATF6路徑，這種調控方式使得宿主細胞不會因病毒感染所造成的持續性ER stress而死亡。另一方面，ER stress除了會導致apoptosis，同時也會活化自噬作用 autophagy 幫助細胞的生存。Autophagy是維持細胞內能量恆定的重要機制，其特色是在作用發生時會產生一雙層膜構造的囊泡稱為自噬體 autophagosome 包裹細胞質內的物質，而後與溶體融合並把內涵物降解掉。實驗室先前研究已發現DV感染會誘發autophagy的產生而促進病毒的複製。然而DV感染時所誘發ER stress對於引起autophagy反應以及對病毒複製的影響目前仍待釐清。本研究之中假說為DV所引發的ER stress會透過UPR路徑活化autophagy，進而促進病毒在細胞內的複製。實驗結果顯示DV需要透過ER stress誘發autophagy而促進病毒複製,而且DV對於三條UPR路徑的調控順序在不同細胞株間都有相似情況。分別抑制三條UPR路徑後觀察到，只有PERK與IRE1訊息傳遞路徑會參與在ER stress誘發的autophagy機制以及影響DV的複製。第一條路徑PERK-eIF2α在病毒感染後6小時就會被活化，且eIF2α下游所調控的路徑之一ATF4-ATG12路徑參與在誘發autophagy的過程。第二條路徑為IRE1，此路徑有兩條分支:其一是IRE1α-XBP1，在病毒感染後24小時活化，然而此路徑也不參與在autophagy的誘發，也不影響病毒子代的產生;而另一條為IRE1α-JNK，此路徑在IRE1α活化時也被活化，觀察到IRE1α-JNK會參與autophagy的誘發機制，且會影響病毒的複製。再深入探討JNK的下游Bcl-2-BECN1路徑，發現在感染後36小時，被IRE1α活化的JNK會磷酸化其下游的Bcl-2。Bcl-2一旦被磷酸化就會與BECN1分離，而脫離Bcl-2的BECN1就能執行其誘發autophagy的功能。第三條訊息路徑是ATF6，連續時間點的實驗中發現，無論是肝癌細胞株 Huh7 或是肺癌細胞株 A549 在感染後36小時這個autophagy被DV誘發的時間點之前，未見ATF6路徑有被活化的現象，而且抑制ATF6表現也對autophagy活性和病毒複製沒有影響。以上結果顯示PERK-eIF2α-ATF4-ATG12以及IRE1α-JNK-BECN1訊息傳遞路徑參與在DV所誘發的autophagy現象而促進病毒的複製。進一步研究發現抑制XBP1的表現，會使IL-8以及TNFα這兩個在DV感染時被大量表現的發炎細胞激素的mRNA 表現有被抑制的現象。總結以上，本研究發現由DV感染引起的ER stress參與在活化autophagy的路徑而影響病毒子代的複製，另一方面我們也發現DV誘發的ER stress會調控發炎因子的產生，而這現象可能會參與在DV重症DHF與DSS的形成機轉。 英文摘要 Dengue virus DV replication associates with the endoplasmic reticulum ER where the virus assembles and buds into the lumen. The unfolded protein response UPR is a cellular ER stress response triggered by accumulation of unfolded proteins in the ER lumen. It has bee