论文名称(中文) 金属离子对A群链球菌氧化压力调节因子PerR结构与.docVIP

論文名稱 中文 金屬離子對A群鏈球菌氧化壓力調節因子PerR結構與功能調控之探討 論文名稱 英文 Effect of metal ions on the structure and function of PerR in group A streptococcus 研究生 中文 林張聖彙 研究生 英文 Sheng-Huei Linchung 中文摘要 A群鏈球菌 GAS, Streptococcus pyogenes 為常見引起人類重要疾病的革蘭氏陽性致病菌。A群鏈球菌雖然不具有可以水解過氧化物的觸酶 catalase ，卻可以在有氧的環境下生存。目前已知A群鏈球菌有一套精密的機制適應氧化壓力，其中調控因子PerR藉由調控基因的表現來維持菌體內金屬離子的平衡，進一步調節過多的氧化壓力。為了探討PerR調控的分子機制，實驗室先前透過結晶學的方法解出具有結合DNA能力的PerR結構. 結果顯示PerR是同型二聚體 homodimer ，每一單體中包含兩個鋅金屬，一個結合在結構形成區 structural site ；另一個結合在調節區 regulatory site 。參考同源蛋白質B. subtilis PerR的研究，我們認為是否有金屬結合在調節區會決定PerR的結構和功能。為了獲得調節區不含金屬的PerR，我們利用金屬離子有限的M9 medium來表現PerR蛋白質 M9 PerR ，並在ICP-OES的分析下證實M9 PerR的金屬含量較先前在LB broth表現的LB PerR低，更進一步發現M9 PerR不具有DNA結合能力。在回填鋅金屬的實驗中，首先觀察到M9 PerR恢復其結合DNA的能力，接著透過測量變性溫度的熱示差掃瞄卡量計 differential scanning calorimetry, DSC ，證明回填鋅金屬可提升蛋白質的穩定性。另一方面，研究調節區帶有H99A突變的PerR蛋白質特性，同樣證實金屬結合在離子調節區決定PerR蛋白質的功能與對金屬的親合力。以上實驗結果證明PerR和鋅金屬結合與否會改變蛋白質的結構，進而決定PerR對DNA結合的能力。 英文摘要 Group A streptococcus GAS, Streptococcus pyogenes , an important Gram-positive human pathogen, is responsible for a wide spectrum of human diseases which ranges from minor to lethal. GAS is a catalase-deficient bacterium, but it can survive in an oxidative environment. Previous studies have reported that GAS regulates oxidative stress and metal homeostasis through peroxide response regulator, PerR. However, the molecular mechanism of PerR regulation is not clear. The crystal structure of PerR which can bind DNA has been solved. PerR structure is a homodimer with a zinc ion binding to structural and regulatory sites in each monomer. It was speculated that binding of metals to the regulatory site decides PerR function. To test the hypothesis, we purified PerR protein without metal-binding to regulatory site and examined its function and structure. In this study, we overexpressed PerR in metal-limited M9 medium M9 PerR and obtained a protein with less metal content compared with LB broth-expressed PerR LB PerR . M9 PerR showed no DNA-binding ability to dpr promo