DBI讲座--qPCR技术--细节决定成败题材.pptVIP

我们为中国的客户带来更好的.......... FREE!!! 我们的生产地——路德维希港（德国） 使用DBI Bioscience的qPCR(SYBR GREEN)最近发表的文章（影响因子20.22分） VEGFR-3 in MacrophagesRestrains TLR4-NF-κB Signalingand Protects against Endotoxin Shock 举例说明： 误差分析及操作规范 如图一系列梯度稀释的模板，理论上它们在扩增曲线上的CT值之差，应该相等，但是后边几个浓度低的样品CT值明显提前了，由熔解曲线可知对于浓度低的样品，引物二聚体引起的误差非常严重。 1. 模板浓度越低，染料法的误差越大 误差分析及操作规范 2. 某一孔荧光信号特别强 原因：① 试剂配制时反应液没完全溶化，导致探针量在一管中增多； ② 试剂配制时没有充分混匀致各管中各成分的量不同； ③ 也可能是PCR仪热槽被荧光物质污染，这时就要清除热槽中的污染； 3.样品浓度跨度过大 样品浓度过高，至阳性样品扩增曲线在后面循环中呈一向下的直线， 误差分析及操作规范 4. 部分样本扩增效率过低 原因：① 提取液残留，一定程度抑制了PCR反应；② 反应液未严格取量混匀或分装不均匀；③试剂失效； 误差分析及操作规范 5. 阴性对照或空白对照翘尾 原因：①模板提取环境有污染；②模板提取操作有污染；