质粒DNA的提取实验报告.docVIP

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2017-06-08 发布于重庆
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质粒DNA的提取实验报告.doc

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质粒DNA的提取实验报告

质粒DNA的提取一、实验方法碱裂解法抽提质粒DNA 二、实验原理基于质粒DNA与染色体DNA变性与复性的差异。分子大小构型 pH4.8 质粒DNA 小环状变性不完全复性染色体大环状完全变性不能复性三、实验步骤 2. 加入100 l溶液1，振荡至彻底悬浮。 3. 加入200 l溶液2，立即轻柔颠倒离心管6次，使菌体充分裂解，随后将离心管冰上放置3分钟 4. 加入150 l溶液3，立即温和颠倒离心管数次，冰上放置3分钟，10，000g离心10min。 5. 将步骤4的上清转移至新的离心管（尽量去除杂质），加入等体积的苯酚/氯仿/异戊醇混合均匀10，000g离心5min。 6. 将步骤5的上清转移至新的离心管，加入2倍体积的无水乙醇，室温放置5－10min，沉降DNA 7. 10，000g离心10分钟,弃乙醇，保留沉淀，加入1ml 70％的乙醇洗涤沉淀， 10，000g离心5分钟 8. 倒掉乙醇溶液，用吸水纸吸净管壁上的水珠，室温蒸发痕量乙醇 9. 加入适量含RNase的TE或灭菌双蒸水溶解质粒DNA 2）质粒鉴定琼脂糖凝胶电泳灌胶：胶中加入荧光染料 SYBR Green I 加样：质粒+上样缓冲液混匀电泳结果观察：UV灯下四、实验结果