6.质粒的转化.pptVIP

质粒的转化 Transformation of plasmid 实验原理 转化(Transformation)是将外源DNA分子引入受体细胞，使之获得新的遗传性状的一种手段，它是微生物遗传、分子遗传、基因工程等研究领域的基本实验技术。 转化过程所用的受体细胞一般是限制修饰系统缺陷的变异株，即不含限制性内切酶和甲基化酶的突变体(R-, M-)，它可以容忍外源DNA分子进入体内并稳定地遗传给后代。受体细胞经过一些特殊方法(如电击法、CaCl2 、RbCl 等化学试剂法)的处理后,细胞膜的通透性发生了暂时性的改变，成为能允许外源DNA分子进入的感受态细胞( Compenent cells )。进入受体细胞的DNA分子通过复制，表达实现遗传信息的转移，使受体细胞出现新的遗传性状。将经过转化后的细胞在筛选培养基中培养，即可筛选出转化子( Transformant，即带有异源DNA分子的受体细胞)。 实验材料和试剂 实验材料： 已制备好的E. coli DH5α感受态细胞。 实验试剂： 含Amp的LB固体培养基：将配好的 LB 固体培养基高压灭菌后冷却至60℃左右，加入Amp储存液，使终浓度为50μg/mL，摇匀后铺板； Amp母液。 实验仪器 实验步骤 从-70℃冰箱中取200μL感受态细胞悬液，室温下使其解冻，解冻后立即置冰上。 加入pBS质粒DNA溶液（含