UPLC测定不同厂家不同批次复方丹参片中4种皂苷成分含量.docVIP

UPLC测定不同厂家不同批次复方丹参片中4种皂苷成分含量 　　摘要：目的：建立利用UPLC同时测定复方丹参片中4种活性成分含量的方法。 　　方法：采用ACQUITY UPLC BEH C-18色谱柱；乙腈（A）-水（B）为流动相二元梯度洗脱，检测波长203nm，柱温30℃，流速0.2ml/min，测定同一厂家10批样品以及市售10厂家样品中4种皂苷的含量。 　　结果：4种活性成分在所建浓度范围内线性关系良好，r均大于0.999。 　　结论：所建立的UPLC方法可快速、简单地对复方丹参片中4种活性成分进行含量测定。 　　关键词：UPLC 复方丹参片 三七 　　【中图分类号】R4 【文献标识码】A 【文章编号】1671-8801（2014）04-0006-02 　　复方丹参片由丹参、三七、冰片三味药组成，具有活血化瘀、理气止痛之功效，临床上常用于治疗冠心病、高血压、心绞痛等病。三七为方中主要药物，其味苦、甘，性温，具有活血祛癖，通络止痛的作用。现代药理研究表明三七中所含活性成分主要是皂苷类，其中以人参皂苷Rg1、Rb1和三七皂苷R1的含量最高。国内外参考文献中有大量关于复方丹参片中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、Re、Rb1含量测定的报导很多，但用UPLC法同时测定几种成分含量的研究少有报导[1-13]。本文利用UPLC法建立了一种同时测定复方丹参片中4种成分含量的方法，并经过验证，认为该方法有效、可行，可作为其质量控制的方法进行推广应用。 　　1 材料与试剂 　　1.1 实验材料。样品分别采集于广东省及广西省，具体来源及批号见表1。 　　1.2 仪器与试药。Waters超高效液相色谱仪，带有二元高压梯度泵、样品处理器、柱温箱、PDA检测器（厂家）；色谱柱ACQUITY UPLC BEH C-18柱（1.7μm，2.1×50mm）；超声清洗器（频率40KHz，功率 300W）（厂家）；CP 224s 型电子分析天平（德国赛多利斯sartorius Sartorius）；Milli-Q纯水处理系统（美国MILLIPO公司）；甲醇（分析纯，乙腈（色谱纯）。三七皂苷R1对照品（110745-200414）、人参皂苷Rg1对照品（110703-201027）、人参皂苷Re对照品（110754-200822）、人参皂苷Rb1对照品（110704-201122）均购自中国食品药品检验所。 　　2 方法与结果 　　2.1 样品溶液和对照品溶液的制备。 　　2.1.1 供试品溶液的制备：取样品10片，除去包衣，精密称重，计算平均片重，研成细粉混匀，精密称取0.5g，置锥形瓶中，精密加入70%甲醇水溶液20ml，称定重量，超声（频率40kHz，功率300W）处理60min，放冷，70%甲醇补足减失的重量，摇匀、滤过，0.45μm滤膜过滤，为供试品溶液[14]。 　　2.1.2 对照品溶液的制备：配制方法酮“2.4.1”项中，各对照品溶液的第3浓度级别溶液，混合对照品溶液各成分浓度为：三七皂苷R1 83.6μg/ml、人参皂苷Rg1 249.36μg/ml、人参皂苷Re 246μg/ml、人参皂苷Rb1 43.68μg/ml。 　　2.1.3 空白对照溶液的制备：按处方比例不加三七，制得阴性对照品，按供试品液的制备方法制得阴性对照品溶液。 　　2.2 色谱条件：色谱柱：ACQUITY UPLC BEH C-18（1.7μm 2.1*50mm）；柱温为30℃；流速0.200ml/min，进样量2μl，检测波长为203nm流动相采用乙腈（A）-水（B）（V/V）二元梯度系统进行梯度洗脱，线性洗脱梯度为：0～8min时19%A，8～ 　　12min时19%～29%A，12～15min时29%A，15～18min时29%～40%A。 　　2.3 含量测定方法，精密吸取上述溶液，按2.2项下色谱条件进样测定，记录色谱图，见图1。 　　结果阴性对照品溶液的色谱图中在三七皂苷保留时间处无吸收峰，阴性无干扰。 　　2.4 标准曲线的绘制。 　　2.4.1 标准贮备液配制。精密称定各对照品适量，置量瓶中，分别用70%甲醇配制成三七皂苷R1（418μg/ml）、人参皂苷Rg1（415.6μg/ml）、Re（436.8μg/ml）、Rb1（410μg/ml）对照品溶液母液，分别精密量取各对照品母液适量，稀释成5个不同浓度级别的对照品溶液，各级别对照品溶液浓度见表2。 　　2.4.2 线性关系考查。取上述对照品溶液，进样测定，以峰面积A为纵坐标，浓度为横坐标绘制标准曲线。结果三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、Re、Rb1在各自的线性范围内呈良好的线性关系。各对照品的回归方程、相关系数线性范围以及检测线结果见表3。 　　2.4.