pcr技术发展概述.pptVIP

对非编码区的一个主要研究方向是对调控元件的研究。因为在非编码区，只有一小部分已被证实为有用成分，能帮助基因开启和关闭以调控基因的表达，即调控DNA,也称为启动子。 序列捕获芯片技术 用微乳滴PCR emulsion PCR, emPCR 来生成扩增产物. 将固化引物的微球与单链DNA文库模板以及必要的PCR反应化合物一起混合, 微球与文库片段的比例适当, 以确保大多数微球结合的单链DNA分子不超过一个. 水溶液与油混合形成油包水结构乳滴. 每个乳滴都是一个进行后续PCR反应的微型化学反应器. 经过多轮热循环, 每个微球表面都结合了数千个相同的DNA拷贝. 然后打破微乳滴后, 扩增微球被收集、富集并固定在一个平的玻璃基板上形成一个无规则的阵列. 转移并放置到刻有规则微孔阵列的微孔板上. 每个微孔只能容纳一个微球. 微孔板被安装成为流通池的一部分. 其中一面可以通过测序反应的化合物, 另一面则与CCD光学检测系统的光纤部件相接触. 测序技术 1,杂交测序 第一代的sanger法,测量耗时耗力,片段短. 2,合成测序 Solexa,Roche 454 焦磷酸法 3,单分子测序 生物纳米孔,非光学显微镜直接碱基成像 Solexa测序 基于PCR原理的扩增技术有了很大的发展. 针对不同的实验标本对象及需求,要选择适合的技术方法.高效,高质量,低成本,这三者间要找到合适的平衡点. 总结 临床实验室中,PCR技术及其应用 江苏大学 周滔 提纲 病毒性心肌炎的临床实例分析 柯萨奇病毒的实验室检测方法 引申,PCR技术,以及DNA测序 六月,18区30床女病人 主诉:上感 鼻塞,轻微咳嗽,无痰,无咽痛 ,乏力 需扶墙走, 不能拿东西 ,头晕.体温38.5°C 体征:胸痛 瞬间痛 无胸闷,发痛前有牙龈肿痛两周,未见脓,未闻及心包摩擦音,奔马律.BP:92/62mmHg,P:92/min. 六月30日入院时:2,3,aVF导联抬高0.2mV. CK 503U/L,CK-MB 56U/L. 当时未查Tro 7月2日:K 3.1 3.5-5.5 mmol/L,Tro 5.27 0-0.1 mmol/L,CK-MB 79.44 0.00-16.00 mmol/L,CK 1123.0 20-200 U/L,hs-CRP 11.53 0.0-3.00 mg/L. ECG:Ⅱ,Ⅲ,aVF导联提示下壁ST段抬高;V4,5,6提示心尖导联抬高. 好转以后T波倒置,异常Q波,有演变表现 心超:收缩功能下降,室壁活动下降,无间断性,普遍的活动降低. 病毒性心肌炎? 急性心肌梗死? 初步诊断 甲强龙腎上腺皮质激素,下调免疫反应. 渐停 罗氏芬,抗感染. 多巴胺,强心升血压 VitC ,VitB6,二磷酸果糖,营养心肌 Kcl,Mgcl2 采取措施 实验室后继推荐检查 病毒抗体效价滴定:Ab效价 640? 320为可疑 ELISA 查柯萨奇病毒IgM,IgG. PCR作为临床科研常用的基因诊断方法,其扩增片段的特异性主要由引物决定,所以设计引物成为PCR成功的关键. 在此,以柯萨奇病毒B3 CVB3 为例 柯萨奇病毒B组3型 GenBank:AY752944.2 球形,衣壳20面体,核心为单正RNA病毒,有衣壳蛋白 VP 编码VP1 tgtcaggctattgaaggacactcctttcatttcgcaggaaaactttttccagggcccagtggaagacgcgataacagccgctatagggagagttgcggat 2500 acagtccgataacttcctgtgaggaaagtaaagcgtccttttgaaaaaggtcccgggtcaccttctgcgctattgtcggcgatatccctctcaacgccta 2410 2420 2430 2440 2450 2460 2470 2480 2490 accgtgggtacagggccaaccaactcagaagctataccagcactcactgctgctgagacaggtcacacgtcacaagtagtgccgggtgacaccatgcaga 2600 tggcacccatgtcccggttggttgagtcttcgatatggtcgtgagtgacgacgactctgtccagtgtgcagtgttcatcacggcccactgtggtacgtct 2510 2520 2530 2540 2550 2560 2570 2580 2590 cacgccacgttaagaactaccattcaaggtccgagtcaaccatagagaacttcctatgtaggtcagcatgcgtgtactttacggagtatgaaaactcagg