虎杖指纹图谱定性与有效成分定量研究.docVIP

虎杖指纹图谱定性与有效成分定量研究 中南林业科技大学 向荣1，孙琴1，乔志斌2，周钰珂2 （1. 中南林业科技大学 生命科学与技术学院 生物技术，湖南 长沙 410004生命科学与技术学院 生物技术，湖南 长沙 410004，为其质量控制提供方法。方法 采用HPLC法建立11批虎杖饮片的化学指纹图谱；采用总量统计矩法计算总量零阶矩（AUCT）、总量响应率 AUCPWT 、总量一阶矩 MCRTT 、总量二阶矩 VCRTT 等参数相似度评价。结果 对11批虎杖饮片进行测定，共标定了13个共有峰，指认了；总量统计矩参数AUCT、AUCPWT、MCRTT、VCRTT的平均值分别为：1.52×106 AU·min、2.31×103 AU·min·mL·mg-1、2.20×101 min、1.10×102 min2；各批次样品的相似度在0.以上。虎杖苷、白藜芦醇、大黄素苷、大黄素的结论 化学指纹图谱结合总量统计矩分析可虎杖饮片。 虎杖为蓼科植物虎杖 Polygonum cuspidatum Sieb. et Zucc 的干燥块茎和根[1]，具有祛风利湿、散瘀定痛、止咳化痰功效[]。虎杖中主要含蒽醌类和二苯乙烯（芪）类成分，其中蒽醌类成分主要为大黄素、大黄酸、大黄酚、大黄素和大黄素甲醚等蒽醌类衍生物，芪类成分主要为白藜芦醇、虎杖苷等[]，具有抗炎、抗氧化[]、抗癌、抗肿瘤[]等功效。1. 药品与试剂 虎杖苷、白藜芦醇、大黄素对照品 均购自南昌贝塔生物科技有限公司）、大黄素苷 均购自南京泽朗医药科技有限公司 ；虎杖（经鉴定为蓼科植物虎杖Polygonum cuspidatum Sieb. et Zucc的干燥根，分别购于长沙11家药房 ，乙腈 色谱纯，美国天地公司 ；娃哈哈纯净水 杭州娃哈哈有限公司 ；其他均为分析纯。2. 仪器 安捷伦1260高效液相色谱仪（Agilent公司，美国）；粉碎机（浙江省永康市金穗机械制造厂）；KQ5200DE型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；CP114型电子分析天平 奥豪斯仪器有限公司，0.0001g ；HH-600型三用恒温水箱（金坛市神科仪器厂）；SHZ-D（Ⅲ）循环水式真空泵（巩义市英峪予华仪器厂）。 1. 色谱条件 安捷伦色谱柱C18柱（250 mm×4.6 mm，5μm）；流动相为乙腈 A -0.1%磷酸水 B 梯度洗脱；检测波长为变波长；流速0.8 mL/min；柱温30℃。色谱图见图1。 图1 虎杖对照品（A）与样品（B）的HPLC图 1-虎杖苷； 2-白藜芦醇；3-大黄素苷；4-大黄酸；5-大黄素；6-大黄素甲醚 2. 供试品溶液的制备 称取虎杖粗粉约0.5 g，置于50 mL量瓶中，加入甲醇超声30 min，冷却，静置，定容，摇匀，0.45 μm微孔滤膜过滤即得供试品溶液。 3. 对照品溶液的制备 精密称定虎杖苷、白藜芦醇、大黄素苷、大黄酸、大黄素、大黄素甲醚各对照品适量，分别置于棕色量瓶中，加甲醇溶解并稀释，分别制备成虎杖苷（64 μg/mL）、白藜芦醇（71 μg/mL）、大黄素苷（73 μg/mL）、大黄酸（0.35μg/mL）大黄素（74 μg/mL）、大黄素甲醚（25μg/mL）的对照品溶液。 4. 方法学考察 按照《中国药典》2010年版方法进行精密度、稳定性、重现性实验等，各RSD均小于3%，表明方法学考察合格。 5. 指纹图谱的建立 （1） 指纹图谱共有模式的建立 将11个不同批次虎杖HPLC色谱图导入《中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A》软件，建立了不同批次虎杖的指纹图谱共有模式，结果见图2。由图2可知，共获得13个共有峰，经化学对照品对照，1号、4号、6号、11号、12号、13号峰分别为虎杖苷、白藜芦醇、大黄素苷、大黄酸、大黄素、大黄素甲醚的峰，各批次样品中12号峰（大黄素）的峰面积较大，分离度较好，为各批次样品所共有，因此确定大黄素峰为参比峰。 图 虎杖HPLC指纹图谱 （2） 共有峰的相对峰面积 以各批次的12号峰 大黄素 为参照峰，计算同一图谱中各共有峰的相对峰面积，1～13号峰的平均相对峰面积分别为：1.304、0.1398、0.0729、0.7945、0.0432、1.3059、0.1952、0.1900、0.1591、0.0314、0.0043、1.0000、0.1877。 （3） 总量统计矩分析 采用指纹图谱的一种定性定量研究新方法：总量统计矩分析法计算不同批次的虎杖样品的总量统计矩参数，如总量零阶矩（AUCT）、总量响应率 AUCPWT 、总量一阶矩 MCRTT 、总量二阶矩 VCRTT []等，计算结果见表1 。 表1 各批次虎杖样品的总量统计矩参数 样品号 参 数 AUCT AU·min AUCPWT A