分子生物学-3翻译2.ppt

Protein Biosynthesis蛋白质的生物合成 主要内容 概述 遗传密码 tRNA 核糖体 蛋白质的生物合成过程 一般特征 原核生物 真核生物 蛋白质的运输和翻译后修饰 二、蛋白质的生物合成过程 三种RNA：mRNA、tRNA、rRNA 原料：20种aa 需要酶及众多蛋白因子、ATP、GTP等 蛋白质合成方向：N端→C端 mRNA的翻译方向：5ˊ→3ˊ 起始密码子多数是AUG，少数是GUG。 SD序列：起始密码子的上游约10个核苷酸的地方往往有一段富含嘌呤的序列。 SD序列与核糖体16S rRNA 3’端的核苷酸序列互补，可促使核糖体与mRNA的结合。 （1）tRNAf Met 带上Met后能甲酰化，是起始tRNA，用于肽链合成的起始。 （2）tRNAmMet带上Met后不能甲酰化，在肽链延伸中起作用。 3.原核生物翻译起始因子 IF-1:增加IF-2和IF-3活性 IF-2：使Met-tRNAf Met 与30S亚基结合，需GTP IF-3：与30S亚基结合，使50S不能与30S结合 进位 成键 移位 核糖体沿mRNA的5ˊ→3ˊ方向移动一个密码子的距离。 肽酰tRNA由A位移到P位 空载的tRNA进入 E位。 RF1识别UAA、UAG， RF2识别UAA、UGA。 RF3协助肽链释放。 2. 肽链释放：释放因子使肽酰转移酶活性转变为水解活性，并释放tRNA，然后核糖体离开。 1. 核糖体：更大，80S，可解离成60S和40S。 2. 起始tRNA： 命名为eIF-n eIF-3：与40S亚基结合，使大小亚基解离； eIF-2：与Met-tRNAiMet及GTP结合； eIF-4：与mRNA的帽子结合。 eIF-5：释放起始因子，使核糖体亚基结合 原核生物和真核生物翻译起始的比较 原核：mRNA先与小亚基结合，再有起始tRNA加入 真核：起始tRNA先结合小亚基，然后在多种因子参与下结合mRNA 原核：依靠小亚基内16S rRNA 3’端序列与SD序列互补、结合来定位于mRNA 真核：mRNA依靠5’帽子的结合因子结合小亚基，然后以搜索机制寻找起始AUG 三、蛋白质的运输和翻译后修饰 引导多肽穿过内质网膜进入腔内； 一般位于新生肽的N端，某些位于中部； 长度为10－40个残基； N端至少有一个带正电荷的残基； 中部有疏水性核； 羧基端有信号肽酶酶切位点。 信号肽的切除 二硫键的形成 高级结构的折叠 糖基化作用 主要形式：转运小泡 高尔基体是细胞内的分拣中心 特定的转运信号指导蛋白质转运到其他区室 多数由游离核糖体合成 翻译后运输（post-translational transport） 蛋白含有前导序列（leader sequences）与定位有关 进入线粒体和叶绿体前先解折叠, 进入后重新折叠, 需要分子伴侣 碱性aa丰富 基本上不含酸性aa 羟基aa含量较高 核定位信号（nuclear location signal, NLS）指引蛋白质从胞质到核内的信号序列。 NLS富含碱性aa 受体与底物结合，与核孔相互作用； GTP水解提供能量，将蛋白转运入核； 入核后，受体与蛋白解离，回到胞质，可再次利用 本章总结 名词解释（※） ：遗传密码（genetic code）、 SD序列、信号肽（signal sequence）、核定位信号（NLS） 遗传密码的基本特点 比较mRNA、tRNA、rRNA的结构及功能（※） 原核生物蛋白质合成过程（※） 比较真核和原核生物蛋白质合成的异同（※） 试述蛋白质的转运途径。 （三）线粒体、叶绿体蛋白的转运 蛋白质跨膜前需解折叠，跨膜后重新折叠成熟的构型 前导序列(Leader sequences) 前导序列介导翻译后的跨膜转运 酵母细胞色素C 氧化酶IV 亚单位的前导序列 开头的12 个氨基酸足以将多肽链导入线粒体的基质中去。 Tom (trans-outer membrane，外膜转运受体蛋白) 形成受体复合物 线粒体蛋白跨膜转运需要受体 Tim(trans-inner membrane，内膜转运受体蛋白) 形成受体复合物。 当蛋白质通过Tom复合物时，暴露于膜间腔。并不被释放而是直接转运到Tim 复合物上。 Recognition Passing through Cleavage（剪切） 前导序列决定蛋白在细胞器中的定位 位于N端，介导蛋白进入基质 前导 序列 基质导向信号 (matrix-targeting signal)： 膜导向信号 (membrane-targeting signal)： 负责导向膜或膜间质 每个信号序列后都有自己的水解部位 Leader of yeast cytochrome