SDS-PAGE浅析.ppt

SDS - PAGE 第 四 章 SDS – PAGE 引言 PAGE的分子筛效应与Rm的关系 lgRm lgU0 - kT 第 一 节 SDS – PAGE测定蛋白质分子量的原理 SDSPAGE 蛋白质区带的距离 Rm 指示剂前沿的距离 第二节 SDS - PAGE 测定蛋白质分子量的条件 1．S D S 与 蛋 白 质 的 结 合 比 SDS : PRO 1.4 : 1 SDS与蛋白质的重量比 4 : 1 SDS 单体浓度 0.5mM 影响SDS 单体浓度 的因素： a. SDS总浓度 b. 温度 15℃ c. 离子强度 200mM 2．蛋白质的二硫键必须打开 变性剂、助溶剂： SDS 还原剂： EtSH – 巯基乙醇 （β – mercaptoethanal DDT – 二硫苏糖醇 （ dithiothreitol 加温： 100℃水浴， 5分钟 3． 标准分子量指示蛋白 4．P A G 的 浓 度 第三节 SDS - PAGE 测定蛋白质分子量的特点 测定的是蛋白质亚基的分子量 肌肉糖原磷酸化酶a 四聚体：360，000 单体： 90，000 第四节 SDS - PAGE 测定蛋白质 分子量的方法 SDS: 还原变性体系（加还原剂），非还原变性体系（不加还原剂） 不连续体系 （有浓缩胶）， 连续体系（无浓缩胶）