第17章重组分解.pptVIP

长散布元件（long interspersed elements, LINES）和短散布元件（short interspersed elements, SINES）是哺乳动物基因组中最丰富的中度重复DNA。在人类基因组中，LINES的全长为6～7 Kb，SINES的长度约为300 bp。它们属于非病毒型反转录转座子。 2.2、非病毒型反转录转座子 哺乳动物基因组中最丰富的LINES是L1家族。L1元件缺少LTR，其末端具有一串长度不等的AT碱基对。完整的L1元件长6.5 Kb，5’、3’端为非编码区（untranslated region， UTR），中间含两个阅读框，ORF1和ORF2。ORF1相当于gag基因，编码一种DNA结合蛋白，ORF2编码逆转录酶。 2.2.1、长散布元件 2.2.2、短散布元件 短散布元件的结构特点是：具有一个内部RNA聚合酶III启动子，具有一长度不同富含A/T的3’末端，以及两侧由靶DNA倍增形成的短正向重复序列。短散布元件的结构使它们能够以RNA为中介在基因组中扩增。 DNA分子的断裂和重新连接导致遗传信息的重新组合，称为重组（recombination）。重组的产物称为重组DNA（recombinant DNA）。由于重组，一个DNA分子的遗传信息可以和另一个DNA分子的遗传信息结合在一起，也可以改变一条DNA分子上遗传信息的排列方式。DNA重组广泛存在于各类生物中，说明重组对物种生存具有重要意义。通过重组可加快物种变异的过程。此外，DNA重组还参与许多重要的生物学过程，比如重组在DNA损伤修复中发挥重要作用。 一、重 组 DNA重组包括: 同源重组（homologous recombination） 位点特异性重组（site-specific recombination） 1、同源重组（homologous recombination） 同源重组（homologous recombination）发生在两个同源DNA分子之间。真核细胞减数分裂过程中，同源染色体彼此配对，同源染色体DNA片段发生交叉与互换。 两条同源DNA分子彼此并排对齐，相互配对DNA中两个方向相同的单链在DNA内切酶的作用下,在相同位置上同时切开。在切口处发生链的交换，形成所谓的连接分子（joint molecule），也称Holliday结构（Holliday structure）。分支点可以发生移动，称为分支迁移（branch migration），分支迁移的结果是在两个DNA分子中形成异源双链区（heteroduplex）。 1.1、 Holliday 模型 重组体 重组体 1.2、Meselson-Radding 模型 Holliday模型要求在两个并排对齐的同源DNA分子的对应位点形成单链切口，从而产生游离的单链末端。然而，在Meselson-Radding遗传重组模型中，仅在一个双螺旋上产生单链切口，形成的游离端在同源位点侵入未打开的双螺旋并取代其中一条链，形成一个D－环（D-loop）（P529)。 1.3、同源重组的双链断裂模型（P530) 根据该模型，重组时两个彼此配对的DNA分子的中的一个发生双链断裂，而另一个保持完整。双链断裂后，在核酸外切酶的作用下，切口被扩大，并且形成2个3’单链末端。其中一个单链末端侵入未打开的双螺旋的同源区，并取代其中的一条链，形成D环。后形成两个Holliday结构。 Holliday 中间体是否真的存在？ 从细菌和动物细胞中可以分离出正在发生重组的质粒和病毒DNA。从它们的电镜照片上，我们可以发现与Holliday中间体的交叉结构和围绕着交叉点旋转形成的Holliday异构体。 1.2、同源重组的分子机制 通过遗传分析，在大肠杆菌中已经发现了3种重组途径，即RecBCD、 RecE、RecF途径（P532)。 这3种途径所共有：（1）产生一个具有3’－OH末端的单链DNA片段；（2）单链DNA侵入其同源双链DNA分子；（3）形成Holliday中间体，并发生分支迁移；（4）内切核酸酶对中间体进行切割，连接后产生重组体；（5）三种重组途径均需要RecA蛋白。 1.2.1、大肠杆菌的同源重组机制 RecBCD通路 RecBCD与dsDNA的末端结合，然后以大约每秒1000 bp 的速度解开DNA双链，同时降解解旋产生的ssDNA。RecBCD对两条单链的降解速度是不一致的，它优先降解3’末端链。一个正在被RecBCD加工的DNA的末端会形成一个5’端拖尾。 Chi位点 RecBCD的酶活性受重组热点Chi的调节。Chi位点大肠杆菌基因组中的一种不对称的8 bp核苷