功能基因组学解析.ppt

* * 二维电泳: 从两种不同的条件中的细胞或组织中收获并溶解蛋白,蛋白粗提物首先根据等电点经过一维电泳分离,然后经过还原和烷化通过SDS根据蛋白分子量大小分离.胶固定后经银染显色,银染不如染色定量准确,但是更为敏感,且适于质谱分析.染色的后蛋白点被纪录并定性.感兴趣的蛋白可以切下后经质谱分析. * * RNAi的应用 基础研究： 降低基因表达(Gene knockdown) 临床应用 抗肿瘤、抗病毒….. III：蛋白质水平 蛋白质是生物活动的主要执行者 结构蛋白 酶 激素 神经递质 受体 抗体 转录因子 …… 蛋白质研究手段 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳 （SDS)； 双向电泳（等电聚焦+SDS)； 质谱； Western印迹； 免疫组化； …… SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳 聚丙烯酰胺凝胶电泳可以根据电荷和分子质量的差异来分离蛋白质。 当阴离子去污剂十二烷基磺酸钠(sodium dodecyl sulfate,简称SDS)与蛋白质结合后，蛋白质分子即带有大量的负电荷，并远远超过了其原来的电荷，从而使天然蛋白质分子间的电荷差别降低乃至消除。 同时，蛋白质在SDS作用下结构变得松散，形状趋向一致，所以各种SDS-蛋白质复合物电泳时的泳动率差异，就反映了分子质量的不同。 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳 等电聚焦电泳，利用等电点不同分离蛋白质。(水平，X-轴） SDS聚丙烯酰胺