生化技术：7亲和层析教案分析.ppt

第三节 提高吸附剂的操作容量 影响吸附剂操作容量的因素 ①配体的性质 ②配体在吸附剂中的含量 ③配体与吸附物结合时的位阻效应大小 ④基质的多孔性 ⑤操作条件 一、在配体和基质间引入“手臂” 1.原理 在配体和基质间引入“手臂”，使配体离开基质的骨架，减小基质的立体（空间）位阻效应，增加配体的活动度和伸入溶液的深度，提高吸附剂的操作容量（特别使用于小分子配体） 例 用对氨基苯硫代吡喃作为配体，Sepharose4B为基质纯化β-半乳糖苷酶时，如果将配体直接连接在基质上，则不能吸附β-半乳糖苷酶，而当在基质和配体之间引入3,3’-二氨基二丙胺琥珀酰胺手臂时，则可有效吸附β-半乳糖苷酶 注意：并非手臂越长越好，因为太长可能折叠弯曲，反而降低吸附容量 2.吸附剂衍生物的制备 ①琼脂糖活化 ②将氨基化合物（如1,6-己二胺;6-氨基己酸等）共价结合于活化的琼脂糖上制成稳定的琼脂糖衍生物 ③在碳二亚胺存在下，基质通过手臂与含羧基或氨基的任何化合物结合成固相载体 ④将琼脂糖衍生物与溴乙酰衍生物或琥珀酸酐等化合物反应后，再与含氨基、酚羟基和咪唑基等基团的化合物反应，即可生成一系列具有不同长度“手臂”的亲和吸附剂 * * * * * 第 七 章 亲 和 层 析 物质分离纯化的依据 利用各分离物质理化特性的差异性 但由于分离方法的特异性不强，导致分离纯化的收得率较低；为