生物科学细胞生物学实验课教案分析.ppt

实验六 人染色体分带技术 — G带 实验目的 实验原理 试剂与器材 操作方法 注意事项 作业与思考 一 实验目的 掌握制备G带染色体方法。 了解G带染色体在细胞遗传学分析中的重要意义。 二 实验原理 染色体显带技术 将染色体标本经过一定程序处理，并用特定染料染色，使染色体沿其长轴显现明暗或深浅相间的横行带文，这些横行带纹为染色体带。 如果染色体上某一区域的DNA为重复序列，转录活性低，相应地包装它们的蛋白质也较稳定，可能通过较强的二硫键形成很稳定的疏水的a-螺旋结构，成为染料沉淀物积累的环境，从而显示出阳带(暗带)。反之，如果染色体上某一区域的DNA富含具转录活性的结构基因，则功能上相对活跃，包装它们的蛋白质也较疏松，构象上类似b-折叠结构，经处理后二硫键断裂，还原为巯基，成为亲水性蛋白，不利于染料沉淀物的积累，所以着色浅，显示阴带(明带)。 Giemsa染料是噻嗪-曙红燃料，着色之一取决于染色体原位形成噻嗪-曙红沉积物，两个噻嗪分子和DNA结合，在此基础之上再结合1个曙红分子；其次取决于一个疏水环境，以利于燃料沉淀而着色。G带显带在用Gimsa染色以前，要用胰蛋白酶进行预处理，将染色体阴性G带区的疏水蛋白除去或使它们的构型变为更为亲水状态，以利于着色。 G带区含有较丰富的A-T对，在间期核呈固缩状态，是DNA晚复制区之一。Giemsa燃料在G带区