微生物辅导解剖.ppt

二、物理消毒灭菌法： 一 高温灭菌的种类 （三）常用的化学杀菌剂或制菌剂 1、表面消毒剂： 指对一切活细胞都有毒性，不能用做活细胞内的化学治疗用的化学药剂。 理想的消毒剂：杀菌力强，使用方便；价廉；对人、畜无害；能长期保存；溶解度大；无腐蚀性等。 消毒剂种类：氧化剂、重金属盐、有机化合物 微生物菌种保藏 （一）微生物菌种的目的 妥善保藏，达到菌不死、不衰、不乱以及便于研究、交换和使用的目的。 （二）菌种的保藏原则： 1、挑选典型优良纯种（最好是它们的休眠体）； 2、创造一个有利于休眠的环境条件； 3、方法的通用性、操作的简便性及设备的普及性。 　 （三）常用的微生物菌种保藏技术 1、斜面传代保藏 将菌种定期在新鲜琼脂斜面培养基上、液体培养基中或穿刺培养，然后在低温条件下保存。它可用于实验室中各类微生物的保藏，此法简单易行，且不要求任何特殊的设备。但此方法易发生培养基干枯、菌体自溶、基因突变、菌种退化、菌株污染等不良现象。 2、矿物油中浸没保藏 可用于丝状真菌、酵母、细菌和放线菌的保藏。特别对难于冷冻干燥的丝状真菌和难以在固体培养基上形成孢子的担子菌等的保藏更为有效。是将琼脂斜面或液体培养物或穿刺培养物浸入矿物油中于室温下或冰箱中保藏。 3、干燥-载体保藏 适用于产孢子或芽孢的微生物的保藏。是将菌种接种于适当的载体上，如河砂、土壤、硅胶、滤纸及麸皮等，以保藏菌种。以沙土保藏用得较多。 4、冷冻保藏 是指将菌种于-20℃以下的温度保藏。 （1）普通冷冻保藏技术 -20℃ ： （2）超低温冷冻保藏技术：要求长期保藏的微生物菌种，一般都应在-60℃以下的超低温冷藏柜中进行保藏。 （3）液氮冷冻保藏技术： 在液氮中保藏的菌种的存活率远比其他保藏方法高且回复突变的发生率极低。液氮保藏巳成为工业微生物菌种保藏的最好方法。 5、真空冻干保藏 此法是微生物菌种长期保藏的最为有效的方法之一，大部分微生物菌种可以在冻干状态下保藏10年之久而不丧失活力。而且经冻干后的菌株无需进行冷冻保藏，便于运输。但操作过程复杂，并要求一定的设备条件。 6、寄主保藏 适用于一些难于用常规方法保藏的动植物病原菌和病毒。 7、基因工程菌的保藏 基因工程菌最好应保藏在含低浓度选择剂的培养基中。 * * * * * * * * * * * * * （二） HMP途径 戊糖磷酸途径 （Hexose Monophophate Pathway） EMP途径 氧化阶段 非氧化阶段 HMP途径关键步骤： 1. 葡萄糖→6-磷酸葡萄糖酸 2. 6-磷酸葡萄糖酸→5-磷酸核酮糖→ 5-磷酸木酮糖 ↓ 5-磷酸核糖→参与核酸生成 3. 5-磷酸核酮糖→6-磷酸果糖+3-磷酸甘油醛 进入EMP） HMP途径的重要意义 为核苷酸和核酸生物合成提供戊糖-磷酸。 产生大量NADPH2，一方面为脂肪酸、固醇等物质合成提供还原力，另一方面可通过呼吸链产生大量能量。 与EMP途径在果糖-1，6-二磷酸和甘油醛-3-磷酸处连接，可调剂戊糖供需关系。 途径中的赤藓糖、景天庚酮糖等可用于芳香族氨基酸合成、碱基合成及多糖合成。 途径中存在3~7碳的糖，使具有该途径微生物的所能利用利用的碳源谱更广泛。 可产生许多种重要发酵产物。如核苷酸、若干氨基酸、辅酶和乳酸（异型乳酸发酵）等。 HMP途径在总的能量代谢中占一定比例，且与细胞代谢活动对其中间产物的需要量相关。 又称2-酮-3-脱氧-6-磷酸葡糖酸（KDPG）裂解途径。 1952年在Pseudomonas saccharophila中发现，后来证明存在于多种细菌中（革兰氏阴性菌中分布较广）。 ED途径可不依赖于EMP和HMP途径而单独存在，是少数缺乏完整EMP途径的微生物的一种替代途径，未发现存在于其它生物中。 （三）ED途径 （五） TCA循环 （二）递氢与受氢 ★经上述脱氢途径生成的NADH、NADPH、FAD等还原型辅酶通过呼吸链等方式进行递氢，最终与受氢体（氧、无机或有机氧化物）结合，以释放其化学潜能 ★根据递氢特别是受氢过程中氢受体性质的不同,把微生物能量代谢分为呼吸作用和发酵作用两大类. 发酵作用：没有任何外援的最终电子受体的生物氧化模式 呼吸作用：有外援的最终电子受体的生物氧化模式； ★呼吸作用又可分为两类： 有氧呼吸——最终电子受体是分子氧O2; 无氧呼吸——最终电子受体是无机氧化物，如NO3-、SO42- 第二节 微生物的耗能代谢 细胞物质的合成 其他耗能反应 细胞物质的合成 CO2的固定 生物固氮 CO2的同化 糖类的合成 氨基酸的合成 生物固氮 生物固氮作用：将大气中分子态氮通过微生物固氮酶的催化而还原成氨的过程。大气中90%以上的分子态氮，都是由微生物固定成氮化物的，生物固氮是地球上仅次于光合作用的