2.2.2动物细胞的融合与单克隆抗体课件.pptVIP

阳性孔 方法——抗原-抗体杂交法 在单克隆抗体制备过程中，两次筛选的原理和方法是不相同的。 ⑻如何得到大量的单克隆抗体？ 体内培养 体外培养 单克隆抗体 ——化学性质单一、特异性强 注射抗原 效应B细胞 骨髓瘤细胞 融合 多种杂交细胞 选择性培养基 筛选1 抗原-抗体杂交法 克隆化 单克隆抗体 筛选2 4.第一次筛选出的杂交瘤细胞为何需进行克隆化培养和专一抗体检测？ 单克隆抗体 筛选 杂交细胞 杂交瘤细胞 体外或体内 细胞培养 筛选 骨髓瘤 细胞 诱导细胞融合 特异性杂交瘤细胞 杂交瘤细胞系 提取 经过免疫的 B淋巴细胞 动物细胞融合技术 动物细胞培养技术 单克隆抗体的制备过程： 特点：既能产生专一抗体又能大量繁殖 特点：特异性强灵敏度高可大量制备 注射抗原 免疫 7、单抗隆抗体的应用 ①作为诊断试剂 ②定位诊断肿瘤、心血管畸形等疾病 用于体外诊断人类和动植物疾病及病原鉴定，纯度高、特异性强，具有准确、高效、简易、快速的优点。 ③用于治疗疾病和运载药物 利用同位素标记单抗，在特定组织成像 制成生物导弹，将药物定向带到癌细胞所在的位置，在原位杀死癌细胞，疗效高、副作用小。 单克隆抗体的优点： 特异性强，灵敏度高，并可以大量制备。 ⑵用于治疗疾病和运载药物 ①特异性强、灵敏度高 生物导弹——单克隆抗体＋抗癌药物 ②疗效高、毒副作用小 结合同位素的单抗 -----生物导弹 结合同位素的单抗 -----生物导弹 单抗 放射性同位素 项目 动物细胞融合 植物体细胞杂交 原理 细胞膜的流动性 细胞膜的流动性和植物细胞的全能性 融合前提 分散成单个细胞 去除细胞壁 诱导方法 聚乙二醇、离心、振动、电激、灭活病毒 聚乙二醇、离心、振动、电激、 结果 获得杂种细胞或细胞产物 获得杂种植株 用途 制备单克隆抗体 培育作物新品种 意义 使远缘杂交成为可能 克服远缘杂交障碍 对比 比较项目 植物体细胞杂交 单克隆抗体的制备 原理 融合前处理 促融方法 　　 用途 过 程 第一步 第二步 第三步 第四步 细胞膜的流动性、细胞的全能性 细胞膜的流动性、细胞增殖 酶解法去壁 小鼠要免疫处理 物理法　化学法 物理、化学、生物法 原生质体的制备 融合亲本细胞的准备 原生质体的融合与筛选 动物细胞融合与两次筛选 杂种细胞的形成与培养 对产生特定抗体的杂交瘤细胞培养 杂种植株的鉴定 单克隆抗体的分离提纯 单抗有助于疾病的诊断、治疗 获得具优良性状的杂种植株 动物细胞工程小结 动物细胞培养：原理、营养、条件、过程、细胞生长特点、结果、应用 动物细胞融合：原理、诱导方法、过程、应用 单克隆抗体的制备：原理、过程、特点、应用 核移植与克隆动物：供体、受体、核移植方法、克隆动物的方法、克隆动物的遗传特性、应用 动、植物细胞工程的比较：植物组培技术与动物细胞培养技术、植物体细胞杂交技术与动物细胞融合技术 ⑶图中B为________过程， 常用_________作为诱导剂 ，该细胞继承___________的遗传特性，既能__________,又能___________ 。 B 体外培养 骨髓瘤细胞 杂交瘤细胞 足够数量的细胞群 注射到 小鼠腹腔 A C 1.下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌的抗体实验方案 ⑴该实验方案的 目是 ； ⑵A是从小鼠的脾脏中取得_______,该细胞能够产生 ； 制备单克隆抗体 B细胞 专一抗体 细胞融合 灭活病毒 双亲细胞 分泌专一抗体 无限增殖 单克隆抗体的制备 1、怎样获得能分泌专一抗体的B淋巴细胞？ 2、从何处获得较多的B淋巴细胞？ 3、用什么方法可以使B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合？ 4、怎样筛选出杂交瘤细胞？ 5、筛选出的杂交瘤细胞产生的抗体都一样吗？ 6、怎样获得只产生特异性抗体的杂交瘤细胞？ 7、怎样获得大量的单一抗体？ 反复注射特定的抗原，免疫小鼠。 小鼠的脾脏 PEG、灭活的病毒等 利用HAT选择培养基培养，筛选 否 用多孔细胞培养板培养，稀释度要保证每个孔内不多于一个细胞。 抗原抗体杂交法检测——呈阳性反应 体内或体外大量培养特异的杂交瘤细胞，从中提取单一抗体。 单克隆抗体 筛选 杂交细胞 杂交瘤细胞 体外或体内 细胞培养 筛选 骨髓瘤 细胞 诱导细胞融合 特异性杂交瘤细胞 杂交瘤细胞系 提取 经过免疫的 B淋巴细胞 动物细胞融合技术 动物细胞培养技术 单克隆抗体的制备过程： 特点：既能产生专一