医学分子生物学-上课用-7.基因结构与表达方法详解.ppt

一种水解式荧光标记探针。寡核苷酸探针的5′端标记一个荧光报告基团（reporter ），3′端标记一个荧光淬灭基团（quencher ）。 每产生一条DNA链，就切断一条探针，每切断一条探针，就产生一个单位信号，信号强度与结合探针的DNA分子数成正比。 * 荧光强度与模板呈正比，故可用于PCR产物的定性及定量分析。 * 制备细胞：多聚甲醛固定、蛋白酶K消化。 原位RT-PCR：地高辛标记、RT-PCR。 产物检测：与地高辛抗体杂交。 * DNA微阵列： ● 寡核苷酸微阵列（oligomicroarray） ● cDNA微阵列（cDNA microarray） 在一微小的基片（硅片等）表面集成了大量分子识别探针，能够平行分析大量基因转录表达，因此又被称为cDNA芯片。 * Western blotting原理与核酸分子杂交相似，只是以偶联标记物的抗体分子作为探针，检测转移到固相支持物上的蛋白质分子。 * * HGP的提出，让人们对基因的序列和功能特别好奇，促使各种测序技术的发展。 * 最常用的测序方法，一次能确定300-500bp序列，操作简便，结果清晰可靠。 * PAGE：polyacrylamide gel electrophoresis。 基于DNA的合成。 * 四种碱基的平均分子量是324。 * * 操作繁杂，所用的化学试剂多为有毒物质，且无法进行自动化分析