19.2-超敏反应性疾病的免疫学检验精选.ppt

* * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 抗原特异性IC 抗原非特异性IC 检测已知抗原与相应抗体形成的IC 不考虑形成IC抗原的性质，检测未知抗原与相应抗体形成的IC总量 一、抗原非特异性CIC检测技术 CIC：分子量600kDa以上，沉降系数＞19S； 热聚合人IgG(heat agglutination human IgG, HAHG)： 作为参考标准品，绘制标准曲线进行CIC定量或测定 A值代表CIC相当于HAHG的含量。 CIC的检测方法：按抗体分子在结合抗原后发生的 物理学和生物学特性的改变而设计。 ①PEG比浊法; ②ELISA法; ③胞法——Raji细胞法; ④抗球蛋白技术—mRF凝胶扩散试验。 （一）PEG比浊法 1.基本原理 聚乙二醇（polyethylene glycol,PEG）为 不带电荷、直链大分子结构的多糖，有强脱水作用， 利用2%～4%浓度的PEG可选择性沉淀大分子CIC。 2.技术要点 生物化学检验。 ①2%PEG沉淀大分子CIC； ②4%PEG沉淀较小分子CIC； ③超过5%PEG选择性沉淀CIC的特性消失； ④温度影响极大，需进行温差校正； ⑤低密度脂蛋白使浊度增加，空腹采血； ⑥高γ球蛋白血症和标本反复冻融浊度增加。 3.注意事项 （二）ELISA法 1.基本原理 ELISA法测定的CIC，是能够结合C1q的 IgG类抗体与其特异性抗原形成的CIC。 2.技术要点 将聚苯乙烯包被上C1q，加入受检血清， CIC中IgG的Fc段与C1q结合，再加抗人IgG·HRP， 形成C1q-CIC-抗人IgG·HRP复合物，加底物显色。 ①灵敏度高于PEG比浊法，检测到0.1mg/L，重复性好等优点； ②C1q制品不易精制, 纯品不稳定，只能检出与补体结合的CIC。 3.方法评价 （三）细胞法—Raji细胞法 Raji细胞是从Burkitt淋巴瘤分离建株似 B细胞系，在体外繁殖传代，细胞表面有高密度的 C1q、C3b、C3d等补体受体，而且不易脱落。 1.基本原理 将定量待检血清、HAHG和Raji细胞混合，使补体、CIC或HAHG与Raji细胞形成复合物，加入抗人IgG·FIC，形成Raji细胞—补体—CIC(或 HAHG)—抗人IgG· FIC复合物，检测荧光强度。 2.技术要点 ①培养条件能改变Raji细胞其表面受体的数量及亲和性，影响检测敏感性; ②待检血清中如有抗淋巴细胞的抗体，能和Raji细胞反应; ③SLE血清中的抗DNA也能和Raji细胞反应，使测定结果偏高。 3.影响因素 ①敏感性高(6mg/L HAHG)，实用性强； ②缺点需培养Raji细胞和同位素标记抗人IgG，操作繁琐; ③Raii细胞培养较困难，不易长期稳定保持其特性，培养条件受限。 4.方法评价 （四）抗球蛋白技术—mRF凝胶扩散试验 1.基本原理 IgG或IgM类自身抗体与IC中IgG的Fc段结合而不与游离IgG结合的特性，mRF与CIC亲和力较强。 2.技术要点 将mRF和待检血清中的CIC在琼脂凝胶中扩散，mRF—CIC结合形成沉淀现象，进行CIC定性或定量。 3.方法评价 敏感度较低100mg/L（HAHG），mRF来源受限，操作费时，难于常规应用。 CIC检测方法的基本原理及敏感性比较 方法 原理 敏感性(mg/L HAHG) PEG比浊法 溶解度 20 超速离心 分子大小 - 分子超滤 分子大小 - 凝胶过滤 分子大小 30 ELISA法 结合C1q 0.1 C1q液相法 结合C1q 10 C1q偏离试验 结合C1q 1～5 抗补体实验 固定补体 0.1 mRF凝胶扩散法 结合RF 100 mRF固相抑制法 结合RF 1～20 抗抗体法 结合Ig 2～3 Raji细胞法 补体受体 6 花环抑制试验 补体受体 10 二、CIC检测方法评价及应用 自身免疫性疾病病程中连续动态观察或辅助诊断： ①试验方法本身不完善； ②IC形成的复杂性，如在生理状态下IC是由各种抗原 与相应抗体所构成的，维持动态平衡。在病理状态 下往往是单一种类IC增高，而此种单一成分增高发 展到足以影响IC总体水平情况下，才能被试验检出。 （一）检测方法评价 ①肾脏疾病：急性肾小球肾炎、移植肾、IgA肾病； ②消化系统疾病：慢活肝炎、原发性胆淤性肝硬化； ③皮肤病：荨麻疹、天疱疮、皮疹性皮炎； ④Ⅲ型超敏反应性疾病：SLE、RA、硬皮症、自身 免疫性溶血性贫血等。 此外，CIC的检测对于肿瘤、肝癌、白血病、霍