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在链霉菌中,线性质粒的接合转移方式可能与F质粒的方式类似。 结合着末端蛋白TP的DNA的5′端作为转移起点(oriT),在转移起点处,TP作为引物起始 DNA的复制,被弃置的带有TP的亲本链开始向受体细胞转移,其过程类似于F/Hfr转移 。 (2) 线性质粒的接合转移 TP:5’结合蛋白 线性质粒 oriT 转移到受体 转座因子 染色体上拷贝数 质粒上拷贝数 天蓝色链霉菌 IS110(1.55kb) IS117(2.5kb) IS118(1.0kb) 类IS118(1.4kb) IS466(1.6kb) 3 2 2 1 2 0 0 1(SCP2) 0 1(SCP2) 变铅青链霉菌 IS113(2kb) IS493(1.6kb) 类IS281(1.4kb) Tn4811(5.4kb) IS1372(1.3kb) IS1373(864bp) 1 3 1 2 5-7 2 1(SLP2) 二、链霉菌中的转座因子 链霉菌中既有温和性噬菌体也有烈性噬菌体,有些噬菌体的寄主范围窄,而有些噬菌体的寄主范围广泛。 三、链霉菌中的噬菌体 天蓝色链霉菌中的ΦC31噬菌体 委内瑞拉链霉菌(S. venezuelae)中的ΦSVl噬菌体 龟裂链霉菌中的RP2和RP3噬菌体 这些噬菌体在链霉菌的基因交换中起重要作用 ΦC31既能溶源又能裂解,噬菌体通过att位点整合到宿主染色体的特异位点上而形成原噬菌体。通过对ΦC31的一系列改造,已经构建了一系列克隆载体,被广泛地应用在链霉菌的基因克隆中。 第三节 链霉菌的接合作用 自然条件下,链霉菌间的遗传重组主要通过质粒介导的接合作用进行,如天蓝色链霉菌A3(2)、变铅青链霉菌66、龟裂链霉菌、庆丰链霉菌等都能进行接合作用,其中对天蓝色链霉菌和变铅青链霉菌的研究较为深入。 一、链霉菌基因重组的发现 塞蒙梯(Sermonti)夫妇和霍普伍德(Hopwood)发现天蓝色链霉菌可通过遗传重组交换产生重组体。他们的实验过程大致可以分为以下三个阶段: ① 将两个不同的营养缺陷型菌株混合培养,使基质菌丝相融合。 ② 一个菌丝的部分染色体通过菌丝间的连接而进入另一菌丝形成局部杂合核。 ③ 局部杂合核在分裂过程中发生染色体交换,结果在同一菌丝体上形成各种单倍重组体孢子。 这样由一个杂合核演化繁殖形成的菌落叫异质系克隆(heteroclone),是放线菌基因重组所特有的现象。 SCP1是在链霉菌中最早发现的第一个与遗传重组有关的性因子。SCP1控制着寄主天蓝色链霉菌的各种致育状态 不含SCP1质粒的菌株:UF(Ultrafertility,超致育型) 携带SCP1质粒的菌株:IF(Initial Fertility,原始致育型) SCP1整合在寄主染色体上的菌株:NF (Normal Fertility,正常致育型)。分别相当于大肠杆菌的F-、F+和Hfr 二、天蓝色链霉菌中的性别体制和遗传重组 1. 天蓝色链霉菌A3(2)的性别体制 天蓝色链霉菌致育类型与大肠杆菌致育类型类似,但是二者之间也有区别: ①在大肠杆菌中F-×F-是不育的,在天蓝色链霉菌中可以从UF×UF杂交中得到少数的重组子,表明它们是可育的。说明还有另外的致育因子,后来发现在天蓝色链霉菌中除SCP1外,还有另一种致育因子(SCP2)。 ②在大肠杆菌中F+×F+或 Hfr×Hfr杂交一般是不可育的,而在天蓝色链霉菌中,NF×NF和IF×IF杂交都是高度可育的。 ③在大肠杆菌中,F+×F-杂交都是F+,Hfr×F-杂交绝大多数都是F-。在天蓝色链霉菌中,则IF×UF杂交子代是IF,而NF×UF杂交子代是NF。说明虽然NF中的致育因子和染色体整合,但每次染色体的转移都必须包括致育因子,所以二者杂交子代的基因型是有区别的。 SCP1与SCP2(或SCP2*)这两种不同的致育因子,在天蓝色链霉菌的遗传重组中的相互关系? SCP1与SCP2或SCP2*在质粒转移方面是独立的,即SCP1的转移不依赖于SCP2的作用,反之同理。 在致育性方面,它们的作用也是独立的,相互之间无干扰作用。当SCP1和SCP2或SCP2*共同存在时,在促进染色体重组方面的作用是累加的。 2.SCP1和SCP2(或SCP2*)与遗传重组 SCP1- SCP2- SCP1- SCP2+ SCP1- SCP2* SCP1+ SCP2- SCP1+ SCP2+ SCP1+ SCP2* SCP1- SCP2- SCP1- SCP2+ SCP1- SCP2* SCP1+ SCP2- SCP1+ SCP2+ SCP1+ SCP2* 10-8 10-6 10-3 10-6 10-5 10-2 - 10-7 10-5 10-5 10-6 10-4 - - 10-3 10
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