2.3DNA的复制解析.ppt

2.4 DNA的复制 DNA Replication(DNA Biosynthesis) 2.4 DNA 复 制 1 引言---基因组复制与细胞分裂的关系 2 复制子 3 参与DNA复制的酶类 4 原核生物DNA复制的基本过程 5 真核生物DNA复制 6 DNA复制的几种形式 7 DNA复制的调控 8 小 结 1 引言---基因组复制与细胞分裂的关系 细胞在每次分裂的过程中，整个基因组都必须精确地复制一次。 如何保证这一点？两个原则 (1) DNA复制的启动决定了细胞的进一步分裂; (2) 复制过程完成前，细胞是不会发生分裂的。 2 复制子(replicon) 2.1 复制子的定义 2.2 不同生物复制子的数目 2.3 复制眼概念 2.4 复制叉概念及其移动方向的实验确定 2.5 复制的模式---起点、方向和速度 2.1 复制子的定义 从复制原点到终点，组成一个复制单位，称为复制子(replicon)（一个DNA分子可能含多个复制子）。 复制子是根据它含有复制所需的控制元件来定义的，在复制的启动位点具有起始点（origin)，在复制的终止位点具有终点（terminus)。起始点仅作用于所在复制子。 注：在每个细胞周期中，每个复制子发生一次复制，且只发生一次。 质粒一般是一个自主环状的DNA基因组，构成一个独立复制子； 原核生物基因组中一般只含一个复制子，在唯一的起始点启动就会引起整个基因组复制； 真核生物基因组含多个复制子（一般40-100kb/个）。 2.3 复制眼概念 复制叉移动方向的确定 起始点可以启动单向复制或双向复制,这主要取决于在复制起点形成一个复制叉还是两个复制叉. 一个复制叉---单向复制 两个复制叉---相反的方向等速前进 （无论是原核生物还是真核生物，DNA的复制主要是从固定的起始点以双向等速方式进行复制） 通常，细菌、病毒和线粒体的DNA分子都是作为单个复制子完成复制的。大肠杆菌染色体DNA以及真核生物的细胞器DNA为双链环状，只有一个复制原点. 真核生物基因组可以同时在多个复制起点上进行双向复制，也就是说它们的基因组包含有多个复制子。而真核生物染色体DNA是线性双链分子，含有许多复制起点。 3.1 DNA聚合酶 核酸外切酶活性 （1）DNA聚合酶 I 103 kDa的单链多肽，可以被蛋白酶切成两段，C端的2/3区域，又称为Klenow片段，同时具有DNA聚合酶活性和3’－5’核酸外切酶活性(校正错配核苷酸)，既可合成DNA链，又能降解DNA；N端的1/3具有5’－3’核酸外切酶活性（切除RNA引物）。 （2）DNA聚合酶 II 　　具有3’－5’核酸外切酶活性，目前认为主要是起修复DNA的作用 （3） DNA聚合酶 III 　　具有DNA聚合酶活性和3’－5’核酸外切酶活性，是大肠杆菌DNA复制中链延长反应的主导聚合酶 DNA-pol III: 由10种亚基组成的不对称聚合体 催化效率最高 复制的保真性(fidelity) 至少依赖三种机制： 1. 遵守严格的碱基配对规律； 2. 聚合酶在复制延长中对碱基的选择功能； 3. 复制中的即时校读功能。 真核生物DNA聚合酶有15种以上，在哺乳动物细胞中主要有5种DNA聚合酶，特性（见P49　表2－12） 真核生物DNA聚合酶与细菌DNA聚合酶基本性质相同。但真核生物DNA聚合酶一般都不具有核酸外切酶活性，推测一定有另外的酶在DNA复制中起校正作用。 引物酶 (primase): 依赖DNA的RNA聚合酶。 催化RNA引物的合成。 在大肠杆菌，引物酶是dna G基因的产物。 RNA引物： 　　在DNA模板的复制起始部位由引物酶催 化NTP的聚合，形成短片段的RNA，为DNA 聚合提供3′-OH末端。 引发体 (primosome): 是由Dna B、Dna A、Dna C以及其他复制 因子一起形成复合体，再结合引物酶形成 较大的聚合体，结合到模板DNA上。 复制开始时，在引发体的下游解开双链， 再由引物酶催化引物的合成。 3.3 DNA连接酶（DNA ligase） 连接DNA链3?-OH末端和相邻DNA链5?-P 末端，形成磷酸二酯键，从而把两段相邻的DNA链连接成完整的链。 反应需要能量。原核生物通过分解NAD为NMN和Pi提供能量，真核生物则消耗ATP。 DNA连接酶在复制、DNA修复、 重组、剪接中均起缝合缺口作用。 是重要的工具酶之一。 1、解链酶(h