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PCR-SSP检测 HLA -B27 一、实验目的 掌握PCR-SSP的原理，了解HLA基因分型的基本方法。 二、实验原理 编码HLA的基因具有高度的多态性，每一个基因座位上有众多的复等位基因，而每一个等位基因都有其各自的DNA序列，因此可用相应的序列特异性引物（ sequence specific primers ，SSP）进行扩增。通过控制PCR反应条件，特异性引物仅扩增与其相应的等位基因，而不扩增其他的等位基因。 PCR-SSP检测 HLA -B27 一、实验目的 掌握PCR-SSP的原理，了解HLA基因分型的基本方法。 二、实验原理 编码HLA的基因具有高度的多态性，每一个基因座位上有众多的复等位基因，而每一个等位基因都有其各自的DNA序列，因此可用相应的序列特异性引物（ sequence specific primers ，SSP）进行扩增。通过控制PCR反应条件，特异性引物仅扩增与其相应的等位基因，而不扩增其他的等位基因。 HLA-B27检测操作流程 一、DNA的提取 1、取1ml RBC裂解液入血样管中混匀，裂解RBC; 2、离心4000rpm?2min; 3、重复步骤1-2两次，最后用棉签吸干管壁液体； 4、取50ulWBC裂解液入上述WBC管中混匀； 5、将WBC管于60 ℃水浴消化20min； 6、取出WBC管再于100 ℃ ，3-5min，灭活蛋白酶K； 7、离心10000 rpm?2min。上清即为富含DNA的PCR模板。 二、PCR扩增 1、吸2ul模板DNA入装有PCR混合液的小管中； 2、将小管置于PCR仪内进行扩增。（需80min） HLA分型方法概述 血清学分型—微量淋巴细胞毒实验 细胞学分型—混合淋巴细胞培养 基因分型 PCR-RFLP PCR-SSCP PCR-SSP PCR-SSOP RSCA PCR-SBT 《实验免疫学》综合思考题 提示 T细胞受抗原刺激后分泌IFN-γ, 试从细胞、蛋白及基因的水平检测T细胞IFN-γ的分泌情况以评估T细胞的功能。（每个水平至少含2种检测方法） 要求：只需要每种方法的基本原理和方法，不需要具体的实验步骤，字数1000字，下周上课时间一定要交 hyf523@ Slide */54 ?1 ?3 ?2 ?2m ?2 ?1 ?2 ?1 Allelic polymorphism is concentrated in the peptide antigen binding site Polymorphism in the MHC affects peptide antigen binding Allelic variants may differ by 20 amino acids Class II (HLA-DR) Class I Example: If MHC X was the only type of MHC molecule Population threatened with extinction Survival of individual threatened Pathogen that evades MHC X MHC XX Example: If each individual could make two MHC molecules, MHC X and Y Impact on the individual depends upon genotype Pathogen that evades MHC X MHC XX MHC XY Population survives MHC YY but has sequences that bind to MHC Y Example: If each individual could make two MHC molecules, MHC X and Y……and the pathogen mutates Population threatened with extinction Survival of individual threatened Pathogen that evades MHC X but has sequences that bind to MHC Y MHC XX MHC XY MHC YY The number of types of MHC molecule can not be increased ad infinitum ….until it mutates to evade MHC Y YRYR XY XX XXR XYR YXR YYR YY X