参考教案-紫甘薯花青素提取纯化及鉴定.docVIP

参考教案： 紫甘薯花青素提取、纯化及鉴定 食品都有一定的颜色特征,色泽的好坏直接影着消费者对食品的可接受性 以及对其品质的评在食品加工业中常用的食用色素有合成色素和然色素两大类。合成色素是由人工合成方法所制的有机色素,具有较好的稳定性,着色强度高、经使用方便等优点。然而,随着医学毒理学和生物究的不断深人,发现曾允许使用的人工合成食用素中,大多数对人体都有不同程度的伤害,有的甚有致畸致癌致突变作用,在使用上逐渐受到限制。 天然食用色素即是源于天然资源的食用色素是从果蔬 、动物及矿物质中提取得到或天 然存在色素的合成复制品。如：类胡萝卜素、花青素、醌类色素、藻蓝素等，大多数天然色素对人体无毒无害,具有维生素活性,富含人体所需的营养物质,有些还对人体有医疗保健的作用。同时,绝大部分的天然色素着色自然,能更好地模仿天然物颜色,并具有特殊的芳香气味,添加到食品中会带来愉快的感觉,更能引起消费者的注意。因此,研究与开发无毒的天然食用色素已成为食用色素发展的总、趋势。 花青素 Anthocyanidins 属酚类化合物中的类黄酮类，是一种水溶性色素，一般存在于植物花瓣、果实的组织中及茎叶的表面细胞与下表皮层。其色泽随 pH不同而改变，由此赋予了自然界许多植物明亮而鲜艳的颜色。在自然状态下，花青素在植物体内常与一个或多个葡萄糖、鼠李糖、半乳糖、阿拉伯糖、木糖等形成糖苷，称为花色苷 Anthocyanin 。现有资料表明花青素有二十余种，在植物中常见的有六种，即天竺葵色素 Pg 、矢车菊色素 Cy 、飞燕草色素 Dp 、芍药色素 Pn 、牵牛花色素 Pt 和锦葵色素 My 。它是由一定数量的儿茶素、表儿茶素缩合而成的聚合体，其分子结构中由于含有不对称碳原子 2位或 2，3位 ，因此具有旋光性。花青素具有很强的极性，可溶于水，易溶于甲醇、乙醇、乙酸乙酯、丙酮，但不溶于乙醚、氯仿、苯等。另外，由于分子中有大量的酚羟基存在，因此具有弱酸性，可溶于碱性水溶液。 原花青素 proanthocyanidins 也是广泛存在于许多植物中的一大类聚多酚类化合物，其结构主要由不同数量的儿茶素或表儿茶素缩合而成，因在一定条件下能分解为花青素而得名。按其聚合度的大小，可把原花青素分为低聚物 二～四聚体 和高聚物 五聚体以上 两类，其中尤以低聚原花青素 Oligomeric Proanthocyanidins，简称OPCs 的研究较多、作用较肯定。【*】 【*】张小军，夏春镗等，原花青素的资源及研究进展，2008年中国药学会学术年会暨第八届中国药师周论文集花青素分子式：C15H11O6 分子量：287.246 2.2 实验步骤 2.2.1原料预处理 选用新鲜，无病虫害，无腐烂的紫甘薯，用水洗净，切成5mm左右颗粒，60℃烘干，粉碎，过60目筛，干燥避光保存 2.2.2紫甘薯色素的提取 提取条件：温度为35～60℃，时间为1小时，料液比为1:25，盐酸浓度为0.5%（或0.1 M柠檬酸水溶液），搅拌或超声波辅助提取提取两次。 提取结束后，将色素提取液放入离心机中，在4000r/min下离心，得到色素上清液，待其冷却到室温后，用相应的提取溶剂定容至100ml，提取溶剂作参比，在525nm下，用1cm比色皿测其吸光度值。 紫甘薯色素的得率 mg/g CV/M C—溶液中色素的浓度 μg/ml ；V—样品液的体积100ml；M—紫甘薯粉末的质量 g 2.2.3紫甘薯色素的纯化 2.2.3.1大孔树脂的预处理 将AB-8大孔树脂用无水乙醇充分浸泡24小时，赶出空气泡。浸泡之后，用水冲洗取代乙醇，再用稀NaCl和稀Na2CO3。溶液冲洗，除去树脂中痕量的防腐剂和残留的单体化合物，最后再用蒸馏水冲洗至无醇味，滤去水分备用。 2.2.3.2大孔树脂吸附纯化及洗脱 将提取上的色素溶液，上样流速为 2.0mL/min，通过装好的AB-8树脂柱，待色素溶液完全吸附后，用浓度80%乙醇进行解吸，流速 2.0mL/min。 紫甘薯色素得率测量 准确移取0.4ml花青素浓液，定容至10ml，525nm测吸光度。对照苋菜红标准曲线或矢车菊标准计算出花青素含量。 3.实验结果及分析 3.1苋菜红标准曲线或矢车菊标准曲线： 3.2花青素含量与纯度分析 3.3花青素光谱性质的测定 与分析 3.4花青素薄层层析 3..5其他性质研究 4结论与讨论：4.1….；4.2….；4.3…. 附：苋菜红（Amaranth）C20H11N2Na3O10S3 结构式： 苋菜红的鉴别方法（10.1g溶于100mL水中，呈玫瑰红色溶液。? （2）本品微溶于乙醇，不溶于油脂，具有酸性染料的特性，能使动物纤维着色。? （3）含有0.001g本品的100mL0.02mol/L乙酸铵溶液，其最大吸收波长为520±2n