实验七兔的超数排卵(早期胚胎观察).doc

实验七、兔的超数排卵（早期胚胎观察） 一、目的和要求 通过实验了解孕马血清促性腺激素（PMSG），人绒毛膜促性腺激素 hCG 的作用。 了解卵子的正常和异常形态结构，认识受精卵和未受精卵之区别。 初步掌握冲卵、检卵技术，为掌握胚胎移植技术打下基础。 二、材料和仪器设备 1．动物： 选择健康的成年未孕母兔。 分组后，用作超排处理的供体。 实验母兔最好用产过仔的母兔，效果较好。 需公兔2～3只。 2．药品： PMSG、hCG、0.9％NaCl、75％酒精、碘酒、新洁而灭、冲卵液、846麻醉药。 3．器材： 玻璃注射器（20ml、10ml、1ml），兔用手术台、创巾、止血纱布、药棉、缝针、缝线、消炎粉、青霉素、链霉素、剪毛剪、止血钳、镊子、手术刀、剪、塑料细管（冲卵管）、表面皿、移卵管、连续变倍实体显微镜。 三、供体兔超排分组及操作步骤 PMSG处理组： 母兔颈部皮肤消毒同上。于颈部皮下一次注射PMSG150IU。之后48～72h时，同上述方法注射同量hCG。即同公兔交配。 四、手术冲胚方法 于注射hCG并与公兔交配后24、36或48h，进行冲胚。 1．应用乙醚、乌拉糖、846麻醉药（耳静脉注射0.3ml/只）等麻醉后，再按外科手术要求打开腹腔。 2．将母兔背朝下方固定于兔手术台上。 3．在兔腹部最后两对乳头的腹中线部剪毛，用沾满肥皂液的纱布清洗局部，再用剃须刀片刮毛，先后用碘酒和酒精棉球由内向外进行消毒。然后盖上创巾并固定。 4．用手术刀在腹部正中线处皮肤切开2～3cm长的术口，再在腹壁肌白线上切一小口，用中指垫着以手术剪来扩大剪口。 5.冲卵时，注意止血，随时用温生理盐水纱布保温术部。 6.打开腹腔后，沿着子宫轻轻引出输卵管及卵巢。与卵巢下脂肪组织处，用长夹夹住以固定卵巢。仔细观察卵巢的变化。记录排卵点（卵巢排过卵后的小红点）。 7.先在卵巢附近找到输卵管伞，从伞部插入冲卵管并用手指或夹子固定，另一端接表面皿。另一人用10ml注射器配上9号针头，吸一管冲卵液（也可用生理盐水代替）。 8.从子宫向输卵管方向，于子宫角末端和输卵管交界的无血管处插入针头，使针头伸入输卵管内并用手指固定。然后慢慢的推动注射器，将冲卵液注入输卵管，使冲卵液由伞部收集到表面皿内。一般每次5ml即可。注意冲卵液不得流失。 五、胚胎观察 将接有冲卵液的表面皿置于实体显微镜下，检查胚胎的数量和发育形态。 正常兔受精卵为卵圆形，直径约140μm，在透明带外围有一厚层粘蛋白层（为兔胚胎特有结构）。卵黄颗粒很细，分布很均匀。容易看到核的变化。在卵黄周隙内可见两个极体。 未受精的卵母细胞中，粗细不一的卵黄颗粒清楚可见，且分布不均。不能看到细胞核。在卵黄周隙内只有一个极体。 一般在交配后24h，受精卵已发育成2-细胞胚胎。48h即发育成16-细胞胚胎（早期桑椹胚）。 六、作业 简述实验过程和结果，根据结果进行分析。 μm微米是长度单位，符号 [micron]。1微米相当于1米的一百万分之一（此即为「微」的字义）。 换算 1 000 000皮米 pm 1 微米 μm 1 000纳米 nm 1 微米 μm 1毫米（mm） 1000微米（μm） 0.001 毫米 mm 1 微米 μm 0.000 1厘米 cm 1 微米 μm 0.000 01分米 dm 1 微米 μm 0.000 001米 m 1 微米 μm 0.000 000 001公里 km 1 微米 μm 0.000 001 微米 μm 1 皮米 pm 0.001 微米 μm 1 纳米 nm 1 000 微米 μm 1 毫米 mm 10 000 微米 μm 1 厘米 cm 100 000 微米 μm 1 分米 dm 1 000 000 微米 μm 1 米 m 000 000 000 微米 μm 1 公里 km