课内生物化学实验论文从啤酒酵母中提取蔗糖酶.docVIP

题名：酵母蔗糖酶的提取纯化及活力测定 姓名：宋烙 学院：长三角绿色制药协同创新中心 班级：绿色国际班 学号：201201391416 2013 年12 月 27日填 酵母蔗糖酶的提取纯化及活力测定 浙江工业大学 绿色制药协同创新中心 宋烙 摘要：采用自溶法从啤酒酵母中提取蔗糖酶，通过离心、热提取、95%乙醇沉淀提取、Q Sepharose-柱层析法来对蔗糖酶进行纯化。至于活力的测定，首先利用3，5-二硝基水杨酸（DNS）法测定5min内酶能催化生成葡萄糖的量来对得到的各个提取液进行蔗糖酶活力的测定。然后再通过Folin-酚法测定蔗糖酶蛋白质含量，之后就可以计算出各个提取液的比活力。最后，用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法来测定蔗糖酶的相对分子质量。 关键词：蔗糖酶； 提取纯化； 酶活力； 蛋白质含量； 相对分子质量 The Extraction Method of Beer Yeast Sucrose and Vitality Test Zhejiang University of Technology Green Pharmacy Xietong Chuangxin Centre Song Luo Abstract: The autolysis extracts sucrose from beer yeast. Then, purifying the sucrose by centrifugalization, hot extraction, 95% ethanol sediment extraction, and Q-Sepharose-column chromatography. As for calculate the radio of live, first of all, using 3,5-dinitrosalicylic acid(DNS)to calculate the each extracting solution’s radio of live by measure how much sucrose the sucrose can catalysis. After that, calculating the content of sucrose by using Lowry method., so it’s available to calculate each extracting solution’s specific activity. Finally, we used SDS-polyacrylamide gel eletrophoresis to measure the sucrose’s relative molecular mass. Keyword: sucrose； extraction； vitality； specific activity； relative molecular mass 前言： 本实验的是一个综合性的教学实验，主要是为了让学生养成规范的科学实验习惯，树立严谨的科研作风。本次综合性的实验既保留了一些旨在加强学生基本实验方法和技能训练的传统实验，也引进了一些新近发展起来的生化实验技术。旨在培养我们的动手能力和良好的科研素质，使我们有一个完整的实验锻炼过程，培养了我们科研思维和独立展开科研工作的能力。 蔗糖酶（Sucrase, EC 3.2.1.26）又称转化酶（Invertase）,1928年Dumas等首先指出酵母菌发酵蔗糖时必须有这种酶的存在，蔗糖酶广泛存在于微生物、植物、动物中[1]。蔗糖在蔗糖酶的催化下生成葡萄糖和果糖。然而，蔗糖酶有多种同工酶，分别处于不同的亚细胞位置，生化特性也不尽相同。[2][3] 蔗糖酶在啤酒酵母细胞汇总存在着两种形式。一种存在细胞膜外细胞壁中高度糖基化的胞外蔗糖酶，其活力占蔗糖酶活力的大部分，含有50%糖的成分。该酶是啤酒酵母蔗糖酶的主要形式。而另外一种是存在于细胞膜内侧细胞质中的低糖基化的胞内蔗糖酶。 材料与方法 1.1材料与仪器 1.1.1 材料 啤酒酵母（市售） 1.1.2 仪器 高速冷冻离心机[Thermo(SORVALL)BIOFOGESTRATOS]；紫外分光光度计 T6新世纪；恒温水浴槽；DYY-6D型电泳仪；凯氏定氮仪等。 1.1.3 试剂 醋酸钠（AR）；甲苯（AR）；4mol/L 醋酸；95%乙醇；0.5mol/L Tris-HCl PH7.3 缓冲液；0.05mol/L Tris-HCl PH7.3 缓冲液；浓硫酸；硫酸钾与硫酸铜混合粉末；30%NaOH溶液；2mol/l NaOH溶液；0.5mol/l NaOH溶液；2%硼酸溶液；混合指示剂；0.01 m