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南 京 师 范 大 学 研 究 生 课 程 学 习 考 试 成 绩 单 （试卷封面） 院 系 化学与材料科学学院 专 业 高分子化学与物理 研究生姓名 吴悦 学 号 101102060 课 程 名 称 化学生物学 授 课 时 间 2010学年度 1 学期 周学时 3 学分 3 简 要 评 语 考 核 论 题 总评成绩 （含平时成绩） 备注 任课教师签名： 批 改 日 期： 注： 1、以撰写论文为考核形式的，填写此表，综合考试可不填； 2、本成绩单由任课教师填写，填好后与作业（试卷）一并送院（系）研究生秘书处； 3、学位课总评成绩须以百分制记分。 研究课题：实时监测蛋白酶固定在聚合物 酶，是由活细胞产生的一种具有特殊催化功能的蛋白质。它具有底物专一性强、催化效率高和反应条件温和等显著特点。在所有生物生命活动的物质代谢中，各种生物化学反应都是在酶的催化作用下高效有序地进行。酶对底物的作用一般有三种模型，即酶和底物都在溶液中、酶固定、底物固定。 第三种模型，底物固定（固相载体上底物的生物转化是将底物固定在固相载体上,而溶解在溶液中的酶扩散到底物附近与之反应。）自然界中这种体系很常见,如在生物体内的催化过程中,一些底物吸附在生物细胞和组织的表面[1,2],溶液中的酶对这些底物的作用有时是很大的,特别是在各种疾病状态下,比如关节炎[3]。这种反应体系在固相化学等领域也有重要的研究价值。 并且，固相合成与液相合成相比优点在于: (1)大大简化反应后处理操作: 不溶性载体键合的聚合物只要简单地反复过滤和洗涤, 即可从可溶性的溶剂和副产物中分离出来, 省时、 省力; (2)可充分利用热力学和动力学因素促进反应: 可溶性试剂可以过量以使反应完全和获得高产率, 过量的试剂可简单地用溶剂冲洗, 过滤清除; (3)逐步合成更为简化: 因为所有的反应都可以在一个容器中进行, 因而也避免了反应中间体转移的手续和损失; (4)易于实现自动化: 所有的操作包括聚合链的增长都可实现自动化; (5)树脂再生: 如果选择适当的连接分子和裂解条件, 高分子树脂可再生重复使用。 由此,M er r if ield 固相合成法以快速简便的操作和高产率, 为多肽研究开辟了广阔的天地, 出现了许多用固相法合成。 但是，如果固相载体所提供的反应环境与反应所要求的环境不兼容,将严重影响反应的收率甚至使反应难以进行。当底物固定在载体内部时,酶与底物的结合力非常重要,这种结合力本质上是酶与固相载体的结合,因为酶首先要扩散到载体上,而载体上的扩散阻力很大,对分子量大的酶阻力会更大[5]。 对固定于表面的底物进行研究以用于分析酶的可接近性、动力学及热力学性质是非常有必要的。随着人们对自动化合成与筛选方案的兴趣越来越浓厚，固相化学与生物化学成为了有吸引力的技术。为监测酶对固定于聚合物玻璃珠或金表面等固相物上的底物的作用，人们发展了一些新颖的方法，包括荧光测定、基质辅助激光解吸离子化飞行时间质谱（matri-assisted laser desorption/ioniza time of flight，MALDI-TOF）以及采用石英晶体微量天平检测直接固定于固相表面的底物分子的重量变化。此外还有人报道了在单个载体住表面实现空间分辨率的方法。这些方法更好的表征了酶进入玻璃珠内部的能力，并且促进了提高酶的可接近性的新型载体材料的发展。同时，固相的反应动力学的修饰利用也引起了重视。 所以，酶对固定化底物的作用的可接近性、动力学及热力学性质与所选的固定化载体的性质密切相关。 固相有机合成的研究包括四个方面： (1) 载体(support)的选择和应用；(2) 载体的功能基化及其与反应底物结合的连接基(linker)；(3) 固相载体上的化学反应及条件优化；(4) 产物从固相载体上解离的方法。 在进行固相有机合成之前,要选择和寻找适宜的固相载体。通常对载体的要求有以下几点： (1)不溶于普通的有机溶剂； (2) 有一定的刚性和柔性；(3) 要能比较容易功能基化，有较高的功能基化度，功能基的分布较均匀；(4) 聚合物功能基应容易被试剂分子所接近；(5) 在固相反应中不发生副反应； (6)机械稳定性好，不易破损；(7) 能通过简单、经济和转化率高的反应进行再生，重复使用。目前固相有机合成中常用的载体材料有苯乙烯-二乙烯基苯交联树脂(简称聚苯乙烯树脂)、TentaGel 树脂、PolyHIPE树脂、聚丙烯酰胺树脂、PEGA树脂（丙烯酰胺丙基-PEG-N,N-二甲基丙烯酰胺）等；无机载体包括