课内生物制药期末.docVIP

生物技术制药：采用现代生物技术，按照人的设想，借助动植物微生物来生产所需的医药品。 生物制药方式：基因工程制药、细胞工程制药、酶工程制药、发酵工程制药 基因工程药物生产的基本过程 目的基因的获得方法：反转录法、反转录-聚合酶链反应法、化学合成法 酵母中的基因表达：载体、启动子等控制序列和宿主细胞三个主要部分。 最佳的基因表达体系：目的基因的表达产量高、表达产物稳定、生物活性高和表达产物容易分离纯化。 真核基因在大肠杆菌中的表达形式 ⑴以融合蛋白的形式表达药物基因 优点：操作简便，表达蛋白在菌体内稳定，易实现高效表达； 缺点：只能作抗原用。（融合蛋白中有一段原核多肽序列，可能会影响真核蛋白的免疫原性，所以不能作为药物） ⑵以非融合蛋白的形式表达药物基因 优点：保持原有蛋白活性； 缺点：易被蛋白酶破坏。带甲硫氨酸，引起免疫反应。 ⑶分泌型表达药物基因 优点：在周质中稳定，有活性，不含甲硫氨酸残基； 缺点：产量不高， 信号肽不易被切割。 基因工程菌的不稳定性 质粒的不稳定性：结构不稳定性：指工程菌分裂时出现一定比例不含质粒的子代菌的现象 分裂不稳定性：重组 DNA 分子上某一区域发生缺失、重排、修饰，导致工程菌性能的改变 提高质粒稳定性的方法 提高基因工程菌稳定性的策略 1.施加选择压力 提高基因工程菌稳定性的策略 2.改进载体受体系统 提高基因工程菌稳定性的策略 3.分阶段控制培养 提高基因工程菌稳定性的策略 4.控制目的基因的过量表达 5.优化基因工程菌的培养工艺 提高基因工程菌稳定性的策略 6.固定化 高密度发酵是一个相对概念，一般指培养液中工程菌的菌体浓度在50gDCW/L以上，理论上的最高值可达200gDCW/L。 高密度发酵可以提高发酵罐内的菌体密度，提高产物的细胞水平量，相应的减少了生物反应器（发酵罐）的体积，提高单位体积设备的生产能力，降低生物量的分离费用，缩短生产周期，从而达到降低生产成本，提高生产效率的作用 影响高密度发酵的因素 培养基 碳/氮 营养物质的配比 溶氧浓度 PH值 温度 代谢副产物 动物细胞大规模培养的方法 依细胞种类： 原代培养 传代培养 依培养基： 液体培养 固体培养 依培养容器和方式： 静止培养、旋转培养、 搅拌培养、微载体培养 中空纤维培养、 固定床或流化床培养 从生产实际分为： 悬浮培养 贴壁培养 贴壁-悬浮培养（微载体培养、包埋和微囊培养、结团培养） 生物反应器必备条件 1制造生物反应器所采用的一切材料，尤其是与培养基、细胞直接接触的材料，对细胞必须是无毒性的 2生物反应器的结构必须使之具有良好的传质、传热和混合的性能 3密封性能良好，可避免一切外来的不需要的微生物的污染 4对培养环境中多种物理化学参数能自动检测和调节控制，控制的精确度高，能保持环境质量的均一 5可长期连续运转 6容器加工制造时要求内面光滑，无死角，以减少细胞或微生物的沉积 7拆装、连接和清洁方便，耐高压蒸汽消毒，便于操作维修 8设备成本尽可能低 动物细胞生物反应器的类型 搅拌罐式生物反应器 气升式生物反应器 透析袋或膜式生物反应器 中空纤维生物反应器 固定床或流化床式生物反应器 离体培养的细胞分为哪些类型 贴壁依赖型、悬浮型、兼性贴壁细胞 单克隆抗体 需解决以下两个问题： ? （1）鼠源性单克隆抗体的免疫原性； ? （2）完整的抗体分子分子量过大，难以穿透实体 肿瘤组织，达不到有效的治疗浓度。 基因工程技术为解决这两个问题提供了可能： ? 制备出:改形抗体、单链抗体、单域抗体、最小识 别单位等很多类型的抗体或抗体单位。 ? 基本消除了单克隆抗体的鼠源性（免疫原性） ? 相对分子质量只有完整抗体分子的1/80~1/3 ? 只保留同抗原特异性结合的活性。 酶工程制药的基本技术 酶法的手性药物合成技术 酶的化学修饰 酶和细胞的固定化 非水介质中的酶催化性质 热力学稳定性、活性 提高 底物特异性发生变化 选择性（立体选择性、区域选择性、键选择性） ? pH值记忆 有机溶剂与酶活性 (1)对吸附在酶分子上的水分的影响 (2)对底物和产物的影响 (3)对酶的直接影响 植物细胞4个生长阶段 延迟 加速 对数 稳定 影响植物次级代谢产物累积的因素 生物条件：外植体、季节、休眠、分化等； 物理条件：温度