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生物技术大实验 实验目的 掌握cDNA克隆的基本技术，主要包括引物设计、核酸提取纯化、 PCR扩增、核酸电泳、细菌转化、蓝白斑筛选、核酸序列分析等。 实验内容 实验一、目的基因的引物设计 实验二、总RNA的提取 实验三、cDNA合成 实验四、PCR扩增 实验五、PCR产物回收纯化 实验内容 实验六、连接反应 实验七、细菌转化 实验八、蓝白斑筛选 实验九、PCR检测阳性克隆 实验十、测序及序列分析 实验安排 第14周：指导学生熟悉cDNA克隆的整个过程 5月23日 理论讲解；实验室安全教育；溶液和培养基的配制；刀具灭菌； 5月24日 总RNA提取及电泳检测 5月25日 cDNA合成和PCR扩增 5月26日 产物回收纯化、连接反应、细菌转化 5月27日 蓝白斑筛选和阳性克隆检测，送测序 第15-16周：开放实验室，每小组选择目的基因，自行设计引物（需在第13周完成），然后完成所选目的基因的cDNA克隆。 实验要求 1、分组实验，每小组选1小组长，负责整个小组的实验安排，各组员均需积极参与实验。最后以小组为单位进行考核，即以各小组实际的实验结果进行评分，不另外安排考试。 2、实验结果主要包括：总RNA电泳图、内参基因检测cDNA的电泳图、PCR电泳图、胶回收电泳图、平板的蓝白斑图、PCR检测阳性克隆的电泳图，每人交1份实验报告，实验报告需要对自己的实验结果进行深入的分析和讨论。